[发明专利]一种寡核苷酸及其衍生物以及它们的应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物工程技术领域，具体地说，是关于一种寡核苷酸及其衍生物以及它们的应用。

背景技术

许多血液系统恶性肿瘤患者在临床上常合并明显的异常出血、凝血征象，其原因除了血小板的异常外，还存在着复杂的出凝血功能异常（Tallman MS,Kwaan HC,Rev Clin Exp Hematol,8(1),E1,2004;Nadir Y,Katz T,Sarig G,et al.Haematologica,90(11),1549-1556,2005）。急性白血病常合并出凝血功能障碍，容易出现出血、血栓等并发症。急性白血病凝血系统的异常与多种因素如组织因子（Tissue Factor，TF）表达增高，肿瘤促凝物质的释放等有关。其中TF的表达增高被认为是急性白血病中导致凝血功能障碍的主要因素之一。

急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia，APL）是急性髓细胞白血病的一个独特亚型（FAB分型AML-M₃），95%~99%的APL病例具有t（15；17）染色体易位，由位于17号染色体（17q21）的维甲酸受体α（RARα）与位于15号染色体（15q22）的早幼粒细胞性白血病基因（PML）融合而成的嵌合基因PML/RARα（Larson RA,Kondo KV,Vardiman JW,et al.Am J Med,76(5),827-841,1984;Gallagher RE,Li YP,Rao S,et al.Blood,86(4),1540-1547,1995;Tallman MS,Andersen JW,Schiffer CA,et al.N Engl J Med,337(15),1021-1028,1997）。该融合基因编码的PML/RARα融合蛋白是APL发病的分子基础（Tallman MS,Andersen JW,Schiffer CA,et al.N Engl J Med,337(15),1021-1028,1997）。与APL的出血症状有关的机制中，病理性幼稚细胞上TF表达的异常增高是最主要的原因之一（Koyama T,Hirosawa S,Kawamata N,et al.Blood,84(9),3001-3009,1994;Falanga A,Consonni R,Marchetti M,et al.Blood,92(1),143-151,1998;Zhu J,Guo WM,Yao YY,et al.Leukemia,13(7),1062-1070,1999）。

TF即凝血因子III，又称为组织凝血活酶。它属于细胞因子受体超家族成员，其基因位于1号染色体短臂（1p21-22），总长度为12.4kb，包含6个外显子，所编码的mRNA长度为2.1kb。TF是一个由263个氨基酸残基组成的分子量为47kD的跨膜糖蛋白，其胞外区包含氨基末端的219个氨基酸残基（丝氨酸1～谷氨酸219）；紧接其后的跨膜区包含23个氨基酸残基（异亮氨酸220～亮氨酸242），该区是一疏水肽段，23个氨基酸中有21个是疏水性的；胞质区包含21个氨基酸残基（组氨酸243～丝氨酸263）。TF的胞外区是凝血因子VII（FVII）或其活化形式（FVIIa）的受体，在凝血过程中作为FVII/FVIIa的辅因子，在Ca²⁺存在的情况下，TF通过其胞外区与FVII/FVIIa结合而形成TF-FVII/FVIIa复合物。TF-FVII/FVIIa的形成大大增强了FVIIa的催化活性，从而启动外源性凝血过程（Camerer E,Huang W,Coughlin SR,et al.Proc Natl Acad Sci USA,97(10),5255-5260,2000）。

另外，TF在恶性肿瘤中除参与高凝状态的形成，还作为一种受体发挥信号传导功能（Jiang X,Guo YL,Bromberg ME,Thromb Haemost,96(2),196-201,2006）。FVIIa与细胞表面的TF结合可以诱导细胞内钙水平的变化，对多种参与细胞生长、转录、细胞迁移的基因具有调控作用，因此TF参与了肿瘤的生长、血管生成、转移等重要的病理过程。由于TF在肿瘤的上述相关病理过程中起关键的作用，因此TF有可能成为一个有前景的抗肿瘤治疗的靶点（Yu JL,May L，Lhotak V,et al.Blood,105(4),1734-1741,2005）。