[发明专利]一种固相片段法合成比伐卢定的方法

权利要求书

1.一种固相片段法合成比伐卢定的方法，包括以下步骤：

1)由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang Resin和Fmoc-Leu-OH反应制备Fmoc-Leu-Wang Resin，再按序列依次连接12个含Fmoc保护基氨基酸，得13肽片段I-Wang Resin；

2)由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang Resin和Fmoc-Gly-OH反应制备Fmoc-Gly-Wang Resin，再按序列依次连接剩余的6个含Fmoc保护基氨基酸，得7肽片段-2-Chlorotrityl Chloride Resin，裂解得Fmoc保护N端的7肽片段II；

3)13肽片段I-Wang Resin与7肽片段II以固相片段法合成比伐卢定-Wang Resin，经脱保护，裂解，纯化冷冻干燥得纯比伐卢定。

2.根据权利要求1所述的一种固相片段法合成比伐卢定的方法，其特征在于，Fmoc-Leu-OH和Wang Resin在DIC+HOBt+DMAP作用下反应制备Fmoc-Leu-Wang Resin；固相逐步合成13肽片段I-Wang Resin，其中Fmoc保护的氨基酸为：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH和Fmoc-Gly-OH。

3.根据权利要求1所述的一种固相片段法合成比伐卢定的方法，其特征在于，制备7肽片段II，其中Fmoc-Gly-OH和2-Chlorotrityl Chloride Resin在DIEA作用下反应制备Fmoc-Gly-2-Chlorotrityl Chloride Resin；其中Fmoc保护的氨基酸为：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH和Fmoc-D-Phe-OH，裂解试剂为TFA-DCM。

4.根据权利要求1-3任意一项权利要求所述的一种固相片段法合成比伐卢定的方法，其特征在于，反应介质为无水DMF或DCM，脱Fmoc保护基试剂为哌啶/DMF，洗涤试剂为无水DMF、DCM和CH₃OH，活化试剂为：A+B+C，其A为HOAt或HOBt，B为HBTU或HATU或TBTU，C为DIEA或DIC。

5.根据权利要求1-3任意一项权利要求所述的一种固相片段法合成比伐卢定的方法，其特征在于，氨基酸活化温度为1～10℃，偶联、裂解温度为1～30℃。

6.根据权利要求1-3任意一项权利要求所述的一种固相片段法合成比伐卢定的方法，其特征在于，13肽片段I-Wang Resin为：

Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-Wang Resin；

7肽片段II-2-Chlorotrityl Chloride Resin为：

Fmoc-D-Phe-Pro-Arg(pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-2-Chlorotrityl Chloride Resin。