[发明专利]一种植物来源活性成分－纳米级膜性囊泡的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物性原料的制备，具体涉及一种植物来源活性成分膜性囊泡的制备。

背景技术

膜性囊泡（exosomes）是一种可由多种细胞分泌的直径约为30-100nm双层膜结构的杯状小囊泡。Exosomes能在细胞间传递蛋白、mRNA、microRNA等活性物质，参与许多重要的生理、病理过程，其独特作用受到越来越多关注。

目前exosomes主要从细胞培养上清、肿瘤组织的渗出液等材料中获取，分离方法主要有滤膜过滤法，超速离心法，蔗糖密度梯度离心法。从细胞培养上清等来源中获取exosome，材料来源有限，材料成本较高，所获得的exosomes含量很低，提纯后的exosomes成本更高，这就制约了exosomes的大规模工业化生产和临床应用。因此，探索从来源丰富的原料中提取exosomes，使其能够实现较低的生产成本及较高的产量，对于exosomes的大规模应用具有重要意义。

多汁性植物中富含exosomes和纳米级膜性囊泡（exosome-like nanoparticles），其携带的各种有效成分赋予植物来源exosomes和纳米级膜性囊泡多种强大的生物学功能，使之能够成为保健食品和治疗性药物的重要来源。

发明内容

本发明的目的是提供一种原料来源丰富、生产成本较低，可大量生产的植物来源活性成分纳米级膜性囊泡（exosome-like nanoparticles）的制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：一种植物来源活性成分—纳米级膜性囊泡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

（1） 植物原料原液的提取：将植物原料榨出汁液；

（2） 上清液或浓缩液的提取：将榨出的液体离心后收集上清液，或超滤提取浓缩液；

（3） 膜性囊泡的沉淀和重悬：将所述上清液或超滤浓缩液离心后收集沉淀，再将所得沉淀重新悬浮后获得膜性囊泡重悬液；

（4） 纳米级均质处理：膜性囊泡重悬液经纳米级均质化，获得纳米级颗粒，即植物来源活性成分纳米级膜性囊泡。

优选的，所述上清液的提取步骤为：将榨出的液体以1000～4000转/分钟（RCF：90~1500×g）离心5～40分钟，弃沉淀，收集上清；上清液2000～8000转/分钟（RCF：300~6000×g）离心10～50分钟，弃沉淀，收集上清；上清液6000～50000转/分钟（RCF：3000~240000×g）离心0.5～2小时，弃沉淀，收集上清。

优选的，所述浓缩液的提取步骤为：将所述植物榨出汁液用10~12500目过滤材料过滤除去残渣，收集滤过的液体；滤过液体采用0.1~0.5μm微滤膜过滤，收集微滤过的液体；再将微滤过的液体采用0.01～0.05μm超滤膜超滤，弃滤过液，收集富含膜性囊泡的浓缩液。

优选的，所述浓缩液提取中的过滤步骤为采用至少一种网孔直径的过滤材料，按照网孔直径由大到小依次过滤。

优选的，所述过滤材料为10~12500目滤网、0.1~0.5μm微滤膜和0.01～0.05μm超滤膜中的一种或数种。

优选的，所述膜性囊泡的沉淀和重新悬浮步骤为：将所述上清液或浓缩液以20000～200000转/分钟（RCF：150000~4000000×g）离心 0.1～3小时收集沉淀，再以生理盐水或者磷酸缓冲液（PBS）重新悬浮膜性囊泡沉淀。

优选的，所述纳米级均质化步骤为：将经重悬处理后的膜性囊泡采用超高压均质机均质化或者振荡机振荡均质化处理获得纳米级颗粒，即植物来源活性成分纳米级膜性囊泡。

优选的，所述植物原料原液的提取、上清液或浓缩液的提取都在0~37摄氏度环境中进行。

优选的，所述植物原料为多汁性植物。

优选的，所述植物原料包括：葡萄、黄瓜、西瓜、西红柿、草莓、蓝莓、樱桃、苦瓜、马齿苋、人参、党参、太子参、西洋参、丹参、白芷、前胡、牛膝、射干、虎杖、商陆、葛根、土伏苓、玄参、红枣、山药、黄精、黄芪、大蒜、桑椹子、枸杞子、生姜、荔枝、龙眼、仙灵脾、薄荷、柴胡、蒲公英、芦根、金银花、连翘、穿心莲、鱼腥草、大黄 、芦荟、番泻叶、五味子、天麻、石斛或更多多汁性植物。