[发明专利]一种α-L-艾杜糖醛酸酶活性检测方法、底物和试剂

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，同时又属于遗传代谢病的临床诊断检测领域。具体而言本发明提供了一种测定α-L-艾杜糖醛酸酶（α-L-iduronidase，EC 3.2.1.76）酶活力的方法，同时本发明还提供了一种作为α-L-艾杜糖醛酸酶（α-L-iduronidase，EC 3.2.1.76）的酶活性检测的底物，此外本发明还提供了测定α-L-艾杜糖醛酸酶（α-L-iduronidase，EC 3.2.1.76）酶活性的试剂。 

  

背景技术

溶酶体是人体细胞内一种由单位膜包裹的细胞器，内部含有多种酸性水解酶，目前已发现的有60多种，如蛋白酶、核酸酶、糖苷酶、脂酶、磷酸酶、溶菌酶等酶类。在细胞内溶酶体酶控制着多种内源性和外源性大分子物质的消化，如核酸、蛋白质、脂质、多糖及糖原等，因此，溶酶体又被称为细胞内的消化器官。人体每天的新陈代谢会产生许多人体不需要的大分子物质，如鞘脂、糖蛋白、粘脂、黏多糖、寡糖、糖原等，这些大分子物质需经过溶酶体酶处理后水解成小分子物质方能继续参与机体代谢或排出体外。如果溶酶体内某种水解酶的活性降低或缺失将会导致特定的生物大分子不能正常降解而在溶酶体中贮积，从而使得溶酶体发生肿胀，细胞变得臃肿失常，细胞功能受到严重影响，最终导致一系列疾病，这类疾病统称为溶酶体贮积症（Lysosomal Storage Diseases，简称LSDs）。依贮积的大分子物质种类差异将溶酶体贮积症分成以下几种主要类型：粘多糖贮积症、糖原累积病Ⅱ型、黏脂质贮积病、神经鞘脂贮积病、糖蛋白贮积症等。 

据欧美国家初步统计资料表明，溶酶体贮积症作为一个整体，在新生儿中患病率可高达1/5,000～1/8,000。目前在中国尚未进行筛查统计，但随着生化检测技术的提高，国内溶酶体贮积症的检出率明显提高，且呈逐步上升趋势。 

黏多糖贮积症(mucopolysaccharidosis，MPS)是一组溶酶体贮积症，是由于溶酶体内某些水解酶缺陷，造成酸性黏多糖(葡糖氨基聚糖)降解受阻导致黏多糖在体内积聚而引起一系列临床症状的疾病。 

黏多糖贮积症属先天性或原发性代谢异常综合征。根据尿糖中所含酸性黏多糖的种类，相关个别酶缺乏或活性低下的种类以及临床表现和影像学表现的不同，将黏多糖贮积症分为7大类型，分别为： 

MPS-I、MPS-II、MPS-III、MPS-IV、MPS-VI、MPS-VII、MPS-IX。

黏多糖贮积症Ⅰ型为常染色体隐性遗传疾病，是由于α-L-艾杜糖醛酸酶(α-L-iduronidase)功能低下或缺失所致，可分为3个亚型：(1)Hurler综合征：即MPS-IH型；(2)Scheie综合征即MPS-IS型；(3)Hurler-Sheie综合征即MPS-H/S型，其改变介于前两型之间。 

黏多糖贮积症I型确诊困难表现在多方面：首先因该病是多系统疾病，涉及遗传、神经、肌肉、血液、骨骼、眼睛等器官或系统，症状表现复杂，并且与多种常见疾病有相似的临床表现，因此医生很难从症状表现上积累诊断经验，因此漏诊、误诊及延误诊断的发生是普遍存在的问题。其次医院现有的各项常规检查等辅助手段均难以达到确诊的目的，如骨髓穿刺、体格检查、心电图、脑电图、B超、CT/核磁、X线、肌肉活检、血清肌酸磷酸激酶检查等诸多检查方法均无法对黏多糖贮积症I型的真正致病因素加以分析，因此不能对患者疾病作出准确诊断。基因检测困难重重，因单核苷酸序列多态性的存在，可能某些突变就是正常的，不会引发疾病，因此给分析带来不确定性；另外由于酶的活性还与其他一些参与酶功能的基因有关，有很多这类基因目前还未被研究人员发现，因此基因检测同样不能作为诊断的可靠依据。