[发明专利]咖啡因半抗原、偶联物及应用、咖啡因检测或测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及制备抗体的半抗原和偶联物的领域，确切地说是指一种咖啡因半抗原、偶联物及应用、咖啡因检测或测定方法。

背景技术

咖啡因(Caffine)又称咖啡碱、茶素，白色或微黄绿色，质地轻软而有丝光的针状结晶，无臭，易溶于水，在干燥空气中可风解。

咖啡因对中枢神经系统有广泛的兴奋作用，小剂量时可祛除疲劳、兴奋神经、消除睡意、改善思维的作用，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏；此外，咖啡因还常配伍麦角胺治疗偏头痛；配伍解热镇痛药治疗一般性头痛。此时，它由于收缩脑血管，减少脑血管搏动的幅度而加强以上药物止头痛的作用。在具有依赖性的药物中，咖啡因的毒副作用较低，但是，应用大剂量咖啡因时会兴奋脊髓，以及引起惊厥；孕期饮用过量咖啡则会导致胎儿发育迟缓，分娩低体重婴儿的危害性增加。此外，咖啡因在刺激兴奋期过后，紧接着会出现行为和精神抑制，患者表现昏昏沉沉。如果是高空作业者、驾驶员或操纵机器者则易发生事故。咖啡因被列入国家第一类精神药品管理范围，临床上限制使用。

随着因吸食咖啡因而导致的刑事案件逐年上升和国家对咖啡因管理的日趋严格，本领域对咖啡因和滥用药物者生物标本中咖啡因的检测提出了更高的要求。

目前，咖啡因的检测主要有薄层色谱法和基于色谱分析方法，如气相色谱分析法(GC)和高效液相色谱分析法(HPLC)。这些色谱分析方法具有高灵敏度和特异性，但操作繁琐，需要精密仪器和受过专业培训的操作人员，且耗时长。

而特定的结合反应，例如抗原-抗体反应，已经广泛用于检测生物样品中存在的各种物质的免疫测试中。其中，胶体金免疫层析技术发展迅速，已被人们所熟知，与仪器色谱分析法比较，胶体金层析技术具有高灵敏度、高特异性、简单快捷、易于操作和无需任何仪器设备等优点。

因此，本领域迫切需要用于建立咖啡因免疫层析分析方法所需的半抗原及偶联物。

发明内容

针对上述缺陷，本发明解决的技术问题在于提供用于建立咖啡因免疫层析分析方法所需的半抗原及偶联物。

为了解决以上的技术问题，本发明提供的咖啡因半抗原，在咖啡因代谢物之一茶碱的7位氮原子上用连接臂衍生而成。

优选地，咖啡因半抗原的结构式为：

其中R表示连接臂，X表示末端基团。

优选地，R选自取代或未取代的亚烷基或芳香基成分、直链或支链的亚烷基或芳香基成分、饱和或不饱和的亚烷基或芳香基成分；X选自羧酸或其酯、胺、马来酰亚胺、卤代羧酸或其酯、醛、醇、二硫吡啶、乙烯砜或硫代羧酸或其酯成分。

优选地，R为C_1-6。

优选地，X是羧基(COOH)、巯基(SH)或氨基(NH₂)成分。

优选地，半抗原选自下面的咖啡因半抗原衍生物：茶碱-7-乙酸；茶碱-7-丁酸；茶碱-7-戊酸。

本发明还一种咖啡因半抗原与产生抗原性的载体物质结合的偶联物，所述咖啡因半抗原为前述的咖啡因半抗原，载体物质为蛋白质、蛋白质片段、合成多肽或半合成多肽。

还有，本发明进一步公开前述的咖啡因半抗原与产生抗原性的载体物质结合的偶联物在检测或测定样品中咖啡因的应用。

另外，本发明再提供一种咖啡因检测或测定方法，包括如下步骤：

(1)、将样品与前述的偶联物接触；(2)、检测或测定咖啡因结合的偶联物；(3)、从校准曲线推测样品中咖啡因的存在或者数量。

以及，一种检测或测定咖啡因的免疫层析分析试纸，所述试纸包括前述的偶联物。

与现有技术相比，本发明提供的咖啡因半抗原、偶联物及应用、咖啡因检测或测定方法，应用在免疫层析技术上，具有高灵敏度、高特异性、简单快捷、易于操作和无需任何仪器设备等优点。

附图说明

图1本发明实施例中咖啡因和它的主要代谢物的结构图；

图2本发明实施例中咖啡因半抗原1的¹H-NMR谱图；

图3本发明实施例中咖啡因半抗原2的¹H-NMR谱图；

图4本发明实施例中咖啡因半抗原3的¹H-NMR谱图；

图5本发明实施例中咖啡因偶联物A偶联成功-紫外扫描图谱；

图6本发明实施例中咖啡因偶联物B偶联成功-紫外扫描图谱；

图7本发明实施例中咖啡因偶联物C偶联成功-紫外扫描图谱。

具体实施方式