[发明专利]人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及1，从健康人的脐带或胎盘组织中提取干细胞，经体外培养、扩增，然后利用此类干细胞制备生物活性物质；2，筛选饱满成熟灵芝孢子，通过现代萌动激活技术，使其三萜类化合物、生物碱、灵芝甾醇和活性酶等多种活性物质的生物转化并提升至高峰值，再利用超低温纳米技术提取其生物活性物质；3，将人源干细胞生物活性提取物与灵芝孢子生物活性提取物按一定比例配伍形成组合物并应用。

背景技术

干细胞(stem cell)是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，是形成人体各种组织、器官的“祖宗细胞”、“万能细胞”。根据其发育阶段可分为胚胎干细胞和成体干细胞，根据分化潜能大小又可以分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。

干细胞可以产生和分泌大量生物活性因子，这些干细胞生物活性因子可有设调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。例如干细胞可以产生干细胞生长因子(SCF)、神经生长因子(NGF)、基质细胞源性生长因子(SDF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、白介素6与7(IL-6与IL-7)、巨核细胞集落刺激因子(M-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)等因子，其中大部分细胞因子都具有促进细胞增殖、分化作用，抑制炎症因子与抗凋亡效应密切相关等；干细胞还可以产生天然免疫蛋白，例如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等，从而抵御或修复自身和外界因素对机体细胞的损伤。研究表明人体骨髓、血管、脂肪组织、骨骼肌、心脏和大脑，也包括在肺、肝、胰腺、消化道、皮肤、视网膜、乳房、卵巢、前列腺和睾丸的上皮内均可分离到相应的干细胞。理论上，干细胞可以修复身体任何部位的组织缺损，可以利用干细胞去治疗遗传疾病、恶性疾病和退变性疾病等。2007年10月10日，国际干细胞权威杂志《Cell》系列刊物《Cell-Stem Cell》的一篇研究论文揭示干细胞功能下降可导致人类衰老，并证明干细胞衰老过程是受到外在和内在因素共同调控的。

因此，利用干细胞分泌产生的生物活性因子或干细胞内的生物活性物质激活机体干细胞，进而通过自身干细胞生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞，在疾病防治与保健美容领域具有广阔的应用前景。

灵芝是一种药用真菌，是传统中药宝库中的一味珍贵药材。灵芝被广泛用于防止多种疾病，具有抑制肿瘤和增强免疫力的功效，且无毒副作用，同时灵芝能有效防止氧化损伤以及由此引起的疾病。

灵芝孢子如同灵芝子实体一样，也含有大量的生物活性物质，且灵芝孢子的生物活性物质比灵芝子实体更高。

鉴于上，我们研究开发从人源干细胞和灵芝孢子中提取生物活性物质，利用这两类生物活性物质组合物发挥综合效应，活化人体自身干细胞来生理性修复或替代机体损伤、病变和衰老的组织细胞，增强机体免疫力。

发明内容

本发明的目的是：1、提供干细胞与灵芝孢子生物活性物质的制备方法；2、提供一种干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质组合物的制备方法及其应用。

本发明的技术方案如下：

从健康人的脐带或胎盘中提取干细胞，使之在体外培养、扩增，并维持干细胞的高增殖能力和稳定性状。脐带或胎盘干细胞体外最多传代至第5代，此时的干细胞不但产量大，而且性状稳定，收集此时细胞。调整细胞至合适浓度密封于冻存管中，经液氮反复冻融至细胞破碎，再通过低温分离、纯化等现代生物技术手段，即可获得高纯度的干细胞生物活性物质群。整个过程要求无细菌、真菌和支原体等污染。

利用种子筛选机筛选新鲜、成熟、饱满、均一的灵芝孢子，放置于专用灵芝孢子萌动培养箱中，在控光条件下，经恒定温水喷洒，采用数字式红外水份仪不断测定灵芝孢子的含水量，控制其含水量在一定范围内，同时利用氧含量测定仪，通过连接含氧气的钢瓶控制灵芝孢子萌动激活时的周围氧气含量。经过一定阶段的萌动培养，激发孢子中的灵芝三萜类化合物、生物碱、灵芝甾醇和活性酶等多种活性物质的生物转化并提升至高峰值，生物活性显著提升并达到顶峰。

筛选萌动激活后的灵芝孢子立即转移至超低温环境中一定时间，使其硬化变脆。超低温微米级研磨，去壳。去壳后的灵芝孢子粉置于纳米研磨机中，进行超低温细磨，获得大小均一的纳米级颗粒，且低温保证了活性物质的最低损耗。最后，经冷凝干燥，去除一定水分，即可获得高品质灵芝孢子粉。