[发明专利]一株能生物合成睾内酯的尖孢镰刀菌及合成方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物工程领域，本发明涉及一种生物合成睾内酯的菌株及合成方法。 

背景技术：

睾内酯是睾酮的衍生物，英文名Testolactone或1，2-dehydrotestololactone等，化学式C₁₉H₂₄O₆，式量300.39，白色或类白色结晶粉末，熔点218～219℃。旋光度[α]D23+45.6°(氯仿)，CAS968-93-4。睾内酯是一种芳香酶抑制剂，能阻止睾酮转化为雌二醇，雄烯二酮转化为雌酮，睾内酯及其衍生物临床上用做细胞毒抗癌药和治疗男性不育等疾病(Dunkel L.Use of aromatase inhibitors to increase final height.Molecular and Cellular Endocrinology.2006，254：207)。 

由雄甾烷或孕甾烷甾体化合物生成睾内酯的开环加氧过程主要涉及到Baeyer-Villiger反应(BVMO)。此反应是1899年，Baeyer和Villiger报道的在氧化剂(通常为过酸)的作用下将非环状的酮生成酯，环状酮生成内酯的方法(Leisch H，Morler K，Lau P C K.Baeyer-Villiger Monooxygenases：More Than Just Green Chemistry.Chemical Reviews，2011，111(7)：4165-4222)。有机化学合成上主要采用过氧化剂，但传统氧化剂大多是有毒和/或易爆的，且几乎所有产物都是消旋体。为得到合适的对映选择性，出现了一些过渡金属氧化剂及贵重金属配体，并需要低温反应，这种方法试剂较昂贵，而且反应条件苛刻，因此只具有理论研究意义。 

1948年，Turfitt在研究一系列甾体的生物转化时，首次发现微生物能催化BVMO反应(Turfitt，G E.The microbiological degradation of steroids：4.Fission of the steroid molecule.The Biochemical Journal，1948，42(3)：376-383)。后续的文献报道表明，BVMO反应可由大量细菌(如节杆菌属，诺尔卡菌属，红球菌属，链酶菌属等)和真菌(新月弯孢霉，曲霉菌属，镰刀菌属，青霉属等)催化(Kolek T， Szpineter A，S′wizdor A.Baeyer-Villiger oxidation of DHEA，pregnenolone，and Androsten-edione by Penicillium lilacinum AM111.Steroids，2008，73：1441-1445)。 

到目前为止，能催化雄甾烷或孕甾烷甾体化合物生成睾内酯的微生物主要为青霉和曲霉， 例如黄绿青霉(Liu H M，Li H P，Shan L H.Synthesis of steroidal lactone by penicillium citreo-viride.Steroids，2006，71(11-12)：931-934)，土曲霉(Kudret Y，Ahmet U，Yasemin G E.Biotransformation of some steroids by Aspergillus terreus MRC 200365.Collection of Czechoslovak Chemical Communications.2010，75(6)：665-673)，溜曲霉(Kudret Y，Ahmet U，Yasemin G E.Baeyer-Villiger oxidation of some steroids by Aspergillus tamarii MRC 72400.Collection of Czechoslovak Chemical Communications.2011，76(6)：743-754)，土霉(Agnieszka B，Jadwiga D G. Transformation of steroids by Trichoderma hamatum.Enzyme and Microbial Technology.2007，40(6)：1615-1621)等，但是存在转化时间较长或者产物不单一等问题。