[发明专利]吸水链霉菌Sh-43菌株及其发酵液生产方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一株拮抗水稻纹枯病菌的吸水链霉菌Sh-43菌株及其发酵液生产方法和应用。 

背景技术

水稻纹枯病俗称“花脚病”，为我国水稻三大病害之一。尤以密植矮秆杂交稻的高产田发病最为普遍而严重，它往往导致叶片枯死，结实率降低，干粒重减轻，一般发病田块能导致减产15 %~20 %，严重时可达60 %~70 %，甚至绝收。该病在早、中、晚稻上均有发生，危害性极大，在世界各稻作区普遍发生且近年来有逐年加重的趋势。 

放线菌因菌落呈放线状而的得名，介于细菌和真菌之间，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖。从Cohn（1872）发现放线菌至今，己经报道了69个属1687个种。到目前为止从放线菌发现的具有生物活性的物质大约有12000种，约占整个天然生物活性物质的50 %左右，其中仅仅从链霉菌属（Streptomyces）就发现近万种。放线菌具有产生抗生素的能力，使其具有抗菌作用，一般单株放线菌可以合成多种抗生素，因而具有广谱的抗菌能力，一些放线菌甚至对十余种病原菌具有拮抗作用。放线菌也是最早应用到生产中的生防微生物，在植物病害防治中发挥了巨大作用。利用放线菌的次生代谢产物—抗生素制备的新农药，由于其具有无污染、无残留、可再生、易于产业化、成本低等特点已成为无公害农药的主体和未来农药的发展方向。 

在当前缺乏抗纹枯病的水稻品种情况下，生产上用的杀菌剂有井冈霉素、灭锈胺、苯甲丙环唑乳油等；其中最常用的井冈霉素自1973年由上海农药研究所开发应用以来，一直是抗纹枯病的当家品种，但因长期连续使用，造成纹枯病菌抗药性增强从而使防治效果不理想。所以有必要发掘新的水稻纹枯病菌的拮抗微生物进行生物防治，筛选出更多有应用价值的新菌种。 

发明内容

本发明针对现今缺乏抗纹枯病的水稻品种，且水稻纹枯病菌对生产上使用的杀菌剂已经产生了抗药性等问题。本发明的第一个目的是提供一株从土壤中筛选拮抗水稻纹枯病菌的吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）Sh-43菌株。本发明的第二个目的是提供采用上述的吸水链霉菌Sh-43菌株生产发酵液的方法。本发明的第三个目的是提供上述的吸水链霉菌Sh-43菌株及其发酵液的应用。 

为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案： 

吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）Sh-43菌株，该菌株的保藏号为CCTCC NO：M2012172，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2012年5月18日。

为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案： 

一种生产上述的吸水链霉菌Sh-43菌株发酵液的方法，该方法包括以下的步骤：

1）在无菌条件下，用接种针挑少许吸水链霉菌Sh-43菌株试管保存菌种，转接于高氏I号的培养平板上，25 ℃~37℃活化培养100~200 h；

2）以同样方式接入活化好的菌种到高氏I号培养平板上，25 ℃~37℃培养80~160 h，作为一级种子；

3）在三角瓶装入种子培养液，接入吸水链霉菌Sh-43菌株一级种子菌饼，25 ℃~37℃摇床培养80~160 h，作为二级发酵种子；

3）在发酵罐装发酵培养液，接种量6~12 %体积比百分比二级发酵种子，转数200~300 r/min，温度25 ℃~37℃，通气量80~120 L/h，罐压0.2~0.4MPa，发酵时间为100~200 h。

作为优选，上述的种子培养液和发酵培养液中有机碳源选用葡萄糖、麦芽糖、D-甘露醇、果糖、蔗糖、半乳糖、乳糖和可溶性淀粉中的一种或多种，氮源选用硝酸钾、硫酸铵、牛肉膏、酵母粉和蛋白胨一种或多种。 

作为再优选，上述的种子培养液和发酵培养液中有机碳源选用可溶性淀粉。 

作为再优选，上述的种子培养液和发酵培养液中氮源选用酵母粉。 

作为优选，上述的种子培养液由以下的组分构成： 

可溶性淀粉 60 g，酵母粉20 g，NaCl 1.5 g，KH₂PO₄ 0.5 g，MgSO₄ 0.5 g，FeSO₄ 0.01 g，水 1000 mL，pH 7.2~7.4。