[发明专利]一种甘蔗液体浅层培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物种苗培育方法，具体涉及一种甘蔗液体浅层培养方法，属生物技术领域。

背景技术

甘蔗（Saccharum Complex）是我国最主要的糖料作物，甘蔗糖产量占我国食糖总产的92%，因此，蔗糖生产关系我国食糖安全，而蔗糖生产则取决于原料甘蔗的生产，种苗质量直接影响原料蔗的产量和品质。

    甘蔗组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现甘蔗种苗的脱毒和快速繁殖。甘蔗组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备的折旧费、供电成本、耗材和人工成本。常规的甘蔗组织培养方法要求接种过程、培养过程都在无菌培养基中进行，无菌消毒耗能大，人工操作成本高。如果能通过培养基改造，获得既保证甘蔗组织正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。由于这种改造后的培养基不需要进行高温高压灭菌，一方面可以降低甘蔗组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用液体浅层培养方法，又可以省去琼脂粉的用量，从而使组培成本更低。采用这种培养基开展甘蔗组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，组织培养过程中的污染问题得到有效控制，甘蔗组织培养无需在严格的无菌环境中进行，从根本上简化了甘蔗组织培养。

    申请号为201110311185.4的发明专利申请“一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法”，介绍了一种培养基无需高压灭菌，不需要超净工作台，接种只要在自然、开放的环境中进行的开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法，从根本上简化组培环节，可降低组培成本20%；但是，组培苗的增殖系数和壮苗数/丛，还是有局限性。

本发明的甘蔗液体浅层培养方法，建立了甘蔗液体浅层培养的技术体系，使培养成本更低，瓶苗更壮，为甘蔗种苗生产提供了一种很实用的关键技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种甘蔗液体浅层培养方法。 

本发明的目的是通过以下方法实现的。

　　本发明的一种甘蔗液体浅层培养方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

　　1. 抑菌剂的配制：使用益培隆杀菌剂配制抑菌剂1号和抑菌剂2号。抑菌剂1号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，并用蒸馏水定容到100 ml，即为抑菌剂1号；抑菌剂2号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，加入1g头孢霉素，并用蒸馏水定容到100 ml，即为抑菌剂2号；所述益培隆杀菌剂由A瓶药剂和B瓶药剂组成，由市场购得；

　　2. 培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂1号与水的体积比为0.3 %～0.5 %（Ｖ/Ｖ）的水溶液中浸泡不少于10 h，保存备用；

 　　3. 培养基配制：诱导培养基为；MS＋2.0 mg/L 6-BA ＋0.5～2.0 mg/L KT +5 ml/L抑菌剂2号＋30 g/L蔗糖，pH5.8；增殖培养基为MS+0.5～1 mg/L 6-BA+0.5～1 mg/L KT+3～5 ml/L抑菌剂2号+30.0 g/L蔗糖，pH5.8；生根培养基为1/2MS+1～3 mg/L NAA +3ml/L抑菌剂2号＋30 g/L蔗糖；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌吟；所述KT，指6-糠氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂2号，按各培养基配方配齐其他原料后，定容、煮开，当温度冷却至50℃时，再按各培养基配方添加抑菌剂2号，用1 mol/L的NaOH或1 mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到培养容器中，封口，冷却后备用；

　　4. 诱导培养：取健壮的甘蔗植株，从最高肥厚带往下30 cm处切下，用75%（Ｖ/Ｖ）的酒精表面消毒；剥离外层叶鞘，取含生长点0.5～1cm长的茎尖，接种到诱导培养基上。诱导培养基的液面与培养瓶底面的距离为0.3～0.5cm，15天转接一次；培养室温度为25～28 ℃，光照12h，光照强度为1200 ～1500 lx；