[发明专利]携带云南番茄曲叶病毒侵染性克隆的农杆菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明所属的领域为基因工程领域，尤其是涉及一种携带云南番茄曲叶病毒侵染性克隆的农杆菌菌株及其应用。

背景技术

二十世纪九十年代以来，随着全球气候变暖和国际间贸易的增加，烟粉虱存在区域空前扩展，由烟粉虱传播的双生病毒也在世界范围内（非洲、地中海盆地、东亚、南亚、中北美及加勒比海地区等）大面积爆发，并已在多种重要作物（番茄、木薯和棉花等）上引起严重危害，给作物生产造成了严重损失。目前已有40多个国家的番茄、木薯、棉花和烟草等作物遭受此类病毒的毁灭性危害。我国已在云南、广西、广东、福建、海南、北京、上海等17个省市的烟草、番茄、番木瓜和南瓜等作物以及假马鞭、胜红蓟、稀硷等杂草上发现了40多种双生病毒，并呈扩展蔓延的趋势。

双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒，病毒粒子为双联体结构，颗粒大小为18 nm×30 nm，无包膜。大多具有经济重要性的病毒为双生病毒科（Geminiviridae）中的菜豆金色花叶病毒属（begomovirus）病毒，自然状态下，该属病毒由烟粉虱（Bemisia tabaci）以持久性方式传播，因而该属病毒也称粉虱传双生病毒（whitefly-transmitted geminivirus, WTG）。

由于特殊的地理位置，云南已成为我国WTGs集中发生分布区之一。在云南省，双生病毒病害主要分布于海拔1300米以下的热带、亚热带气候类型区以及温带设施农业栽培区，包括北部金沙江流域、西部澜沧江-怒江流域、中南部红河流域以及南部澜沧江流域。目前，已在云南鉴定的WTGs有21种，占我国种类的近50%。

番茄是全球重要的蔬菜作物，它品种多，适应性广，营养丰富，是全世界总产量最高的30种农作物之一。目前，在番茄上鉴定的双生病毒种类已有近二十种，双生病毒已成为番茄生产的重要制约因素之一。番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）是在全球范围内危害番茄最重的双生病毒。近年，在云南番茄上发现了一个双生病毒新种——云南番茄曲叶病毒，该病害在番茄上的危害日益加重。

植物病毒侵染性克隆是研究病毒功能基因组的前提。1982年，植物DNA病毒的侵染性克隆首次在番茄金色花叶病毒（Tomato golden mosaic virus,TGMV）中构建成功。虽然该技术产生较迟，但是发展却是极为迅速，特别是对于不能机械传播的病毒，其侵染性克隆的构建为进一步研究病毒基因组结构、功能和表达调控机制提供了可能。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种携带云南番茄曲叶病毒侵染性克隆的农杆菌菌株及其应用。

携带云南番茄曲叶病毒侵染性克隆的农杆菌菌株：保藏号为CGMCC No.5931，能产生云南番茄曲叶病毒的侵染性克隆。

所述的云南番茄曲叶病毒的侵染性克隆为：利用PCR、酶切、基因连接的分子生物学方法将1.4个正向重复的云南番茄曲叶病毒的全长基因组DNA构建在高效植物表达载体pBinPLUS上。

携带云南番茄曲叶病毒侵染性克隆的农杆菌菌株用于云南番茄曲叶病毒的致病性分析、病毒基因功能研究。用于抗云南番茄曲叶病毒的抗性品种筛选，为番茄抗病育种服务。

本发明与现有技术相比具有有益效果是：1）提供的农杆菌菌株可以大量产生云南番茄曲叶病毒的侵染性克隆；2）利用本发明提供的侵染性克隆能高效侵染多种植物，无需昂贵的仪器、操作简单、重复性好；3）利用本发明提供的侵染性克隆可有效用于云南番茄曲叶病毒的致病性分析、病毒基因功能研究；4）利用本发明提供的侵染性克隆用于云南番茄曲叶病毒病的抗性品种筛选，为番茄抗病育种服务。

附图说明

图1 云南番茄曲叶病毒的致病性分析，；

图2 云南番茄曲叶病毒在不同番茄品种上的症状；

图3 云南番茄曲叶病毒接种不同番茄品种的PCR检测结果。

具体实施方式

携带云南番茄曲叶病毒侵染性克隆的农杆菌菌株：2012年3月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，分类命名：云南番茄曲叶病毒的侵染性克隆，保藏号为CGMCC No.5931，它能产生云南番茄曲叶病毒的侵染性克隆。