[发明专利]利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒

权利要求书

1.一种利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒，其特征在于：它包括下列份数比的物质：10×红细胞裂解液50人份，50ml，、TRIzol50人份，50ml、氯仿50人份，30ml、无水乙醇50人份，40ml、反转录PCR试剂50人份，0.8ml、检测体系PCR反应液50人份，1.15ml、阳性对照品和阴性对照品。

2.根据权利要求要求1所述的利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒，其特征在于：所述的10×红细胞裂解液为：NH4CL 82mg/ml、NAHCO38.4mg/ml、EDTA-NA2 3.72mg/ml、DEPC-ddH2O定容至配制体积。

3.根据权利要求要求1所述的利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒，其特征在于：所述的反转录PCR试剂包括：5×RT buffer 120μl、RT Enzyme 25μl、Random Primer 30μl。

4.根据权利要求要求1所述的利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒，其特征在于：所述的检测体系PCR反应液包括：Taq聚合酶1μl，dNTPs4μl，Tris-HCl buffer 12.5μl，镁离子2μl，检测目的基因用上游引物为：L-F0.8μl或S-F0.8μl，下游引物为L/S-R0.8μl，目的基因探针为L/S-Probe 0.4μl，检测内参基因Abl用引物为abl-F0.8μl，abl-R 0.8μl，内参基因探针为abl-Probe 0.4μl；

其中，检测目的基因用上下游引物和目的基因探针的比例优选为：S-F：L/S-R：L/S-Probe的摩尔比为2；2；1；

检测内参基因abl用上下游引物和内参基因探针的比例优选为：abl-F：abl-R：abl-Probe的摩尔比为2：2：1；

所使用的扩增PML-RARαL型/S型融合基因的引物和探针分别为：

L-F:AGGTCTTCCTGCCCAACAG

S-F:TGCGCCTGCAGGACCTCAG

L/S-R:AAGGCTTGTAGATGCGGGGTA

L/S-Probe:FAM-CAGAGCAGCAGTTCTGAAGA-TAMRA

所使用的扩增abl内参基因的引物和探针，分别为：

abl-F:GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG

abl-R:ATGATATAGAACGGGGGCTC

abl-Probe:FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。

5.根据权利要求要求1所述的利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品分别为含有PML-RARαL型/S型融合基因的溶液；所述阴性对照品为无PML-RARα(L型/S型)融合基因的溶液。

6.根据专利要求1-5所述的利用荧光定量PCR技术检测PML-RARα融合基因相对表达量的检测试剂盒，其特征还在于：它作为检测急性早幼粒细胞白血病患者体内PML-RARαL型或S型融合基因微量残留。