[发明专利]一种快速检测端粒酶活性的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种快速检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于包括盒体和4个试剂管；其中第一试剂管装有延伸反应混合物，第二试剂管装有标记的分子信标序列，第三试剂管装有ExoIII，第四试剂管装有1x NEB Buffer 1。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于所述的反应混和物成分为：20 mM Tris-HCl，pH 8.3；1.5 mM MgCl₂；63 mM KCl；0.05% Tween 20(w/v)；1 mM EGTA；10 μM dATP；10 μM dGTP；10 μM dCTP；10 μM dUTP；300 nM延伸反应引物；0.1 mg/ml BSA；其中所述的延伸反应引物序列为：5’-AAT CCG TCG AGC AGA GTT-3’；所述的标记的分子信标序列为：5’-（荧光基团）-TAG GGT TAC TAA CCC TAA CCC TAA CCC T-(淬灭基团)-AA CCC TAA CCT TT-3’，其中斜体字母代表锁核酸LNA。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于所述的荧光基团包括：5’ 6-FAM、5’ TET、5’ HEX、5’ TAMRA、5’ CY5、中间6-FAM-dT、3’ 6-FAM、3’ TAMRA、中间TAMRA-dT、5’ ROX、3’ ROX、5’ Texas Red、5’ Cy3、中间Cy3、3’Cy3、3’Cy5、5’Cy5、5’Cy5.5、5’AMCA、3’AMCA、5’JOE、3’JOE、Alexa Fluor 488、5’ Methylene Blue、3’ Methylene Blue、FR610；所述的淬灭基团包括：3’ BHQ -1、3’ BHQ -2、3’ Dabcyl、5’ Dabcyl、3’ Eclipse。

4.根据权利要求1-3任意一种快速检测端粒酶活性的试剂盒的应用，其特征在于按步骤实现：

从细胞中提取含端粒酶的样品；

 在2 μL含端粒酶样品中分别加入48 μL延伸反应混合物，30℃孵育1 h，获得延伸产物；其中所述的延伸反应引物序列为：5’-AAT CCG TCG AGC AGA GTT-3’；

将上述延伸产物，分别添加含1x NEB Buffer 1，100 U ExoIII，2 μM 标记的分子信标序列，将反应混合物置于37 ℃ 2 h后，使用可见光分光光度计读取结果；其中所述的标记的分子信标序列为：5’-（荧光基团）-TAG GGT TAC TAA CCC TAA CCC TAA CCC T-(淬灭基团)-AA CCC TAA CCT TT-3’，其中斜体字母代表锁核酸LNA。