[发明专利]一种玉米农华101种子纯度检测方法

权利要求书

1.一种玉米农华101种子纯度检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)种子蛋白质提取：取单粒种子粉碎后，加入0.6-0.8ml蛋白提取液，摇匀，盖好后在室温放置20-40min，加样前4000-8000rpm离心10-20min；

2)取步骤1)离心后的上清，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；

3)电泳后将胶板进行染色，按农华101的标准谱带鉴别出异品种种子粒数，计算品种纯度，

其中，所述的蛋白提取液为含有质量分数为15-20％和体积分数为15-20％的冰醋酸的水溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝胶电泳的电极缓冲液为含有体积分数为0.3-0.5％冰醋酸和质量分数为0.03-0.05％甘氨酸的水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离胶按如下方式制备：

1)制备制胶液：

1号：90g丙烯酰胺+3g甲叉双丙烯酰胺加水溶解并定容至500ml；

2号：60g脲加水溶解并定容至200ml；

3号：48ml 1M氢氧化钾+17.2ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml；

5号：四甲基乙二胺的原液；

6号：10g过硫酸铵加水溶解并定容至100ml；

2)灌分离胶：

依次取1号22.5ml、2号5ml、3号3.75ml、6号1.6ml、5号0.2ml混合摇匀后，灌入胶室至距顶端2-3cm为止，避免形成气泡，胶聚合后，用滤纸或注射器吸去析出的水。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩胶按如下方式制备：

1)制备制胶液：

1号：90g丙烯酰胺+3g甲叉双丙烯酰胺加水溶解并定容至500ml；

2号：60g脲加水溶解并定容至200ml；

4号：48ml 1M氢氧化钾+2.9ml冰乙酸加水溶解并定容至100ml。

5号：四甲基乙二胺的原液；

6号：10g过硫酸铵加水溶解并定容至100ml；

2)灌浓缩胶：

依次取1号3ml、2号2ml、4号5ml、6号0.3ml、5号0.04ml迅速摇匀后灌入分离胶上面，并立即插入样品梳，待浓缩胶聚合后拔出样品梳，用吸去各凹槽中多余的水分。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，聚丙烯酰胺凝胶电泳中，每个样品加样25-30μl。