[发明专利]电喷雾萃取电离串联质谱快速检测尿中1-OHP的方法

权利要求书

1.一种电喷雾萃取电离串联质谱快速检测尿中1-OHP的方法，其特征在于借助电喷雾萃取电离EESI源和商业化仪器LTQ-XL型线性离子阱质谱仪，尿样直接进行电喷雾萃取电离串联质谱检测，具体操作步骤如下：

（1）1-OHP母液的配制：准确称取10.0 ± 0.5 mg 1-OHP，置入大瓶中，加入甲醇溶解，得到浓度为100 ± 5mg L^–1的1-OHP母液；将该母液转移至棕色小瓶中，4± 0.2 ^oC密封避光保存；

（2）1-OHP标液的配制：移取有效体积1-OHP母液，用甲醇稀释为浓度20 ± 1 μg L^–1的1-OHP标液，将该标液转移至棕色小瓶中，4 ± 0.2 ^oC密封避光保存；

（3）加标尿样的准备：取有效体积1-OHP母液，浓度为100 ± 0.5 mg L^–1，用尿样逐级稀释，得到1-OHP加标浓度为0.01–5 mg L^–1的加标尿样；加标后尿中1-OHP浓度为未加标前尿，即水解尿样1-OHP浓度的1.5–3.0倍；

（4）EESI源参数的设置：ESI溶剂管路和样品溶液管路间的距离与角度分别为1–2 mm和40–70^o，二者与质谱仪金属离子传输管入口的距离和角度分别为6–15 mm和145–160^o；初级ESI溶剂为含有1.0 × 10^–3–1.0 × 10^–2 M醋酸铵或7.0 × 10^–3–1.5 × 10^–1 M氨水的甲醇水混合溶剂，体积比大于95%，流速1–4μL min^–1；样品溶液流速4–7μL min^–1；ESI电压– 3– – 4 kV；金属离子传输管温度350–400 ^oC；样品雾化气为高纯氮气，纯度99.999%，压力1.0–1.4 MPa；

（5）串联质谱MS/MS参数的设置：负离子检测模式；母离子m/z 217；母离子隔离宽度2.0；活化值Q为0.40–0.50，碰撞能量NCE为35–55%，碰撞时间 30 ms；质量数扫描范围50–350；离子阱最大离子注入时间 200 ms；实际注入离子量由自动获取控制确定；碰撞气He气，离子阱内压力0.82–0.83 × 10^–5 Torr；离子透镜其它MS条件由LTQ-XL-MS自动优化得到；

（6）样品检测：在相同EESI-MS/MS条件下，分别分析溶剂空白、1-OHP标液、未加标尿样和梯度浓度加标尿样；每次进样0.5 min，平行进样6次；测定MS/MS谱图中m/z 217、m/z 189处质谱峰强度，进行定性定量分析；m/z 189处质谱峰是1-OHP分子离子二级质谱碎片离子；

（7）数据处理：包括（a）定性分析和（b）定量分析两部分：

（a）定性分析：以1-OHP标液MS/MS谱图中m/z 189和m/z 217处质谱峰强度比值为参照，对比样品MS/MS谱图中m/z 189和m/z 217处质谱峰强度比值，确认样品中1-OHP是否被检出；

（b）定量分析：采用标准加入法定量尿中1-OHP，同时，为减少EESI源和质谱仪长期操作对1-OHP信号响应的影响、提高分析结果的稳定性，在初级ESI溶剂中加入浓度为0.1 mg L^–1的OHP的氘代1-OHP，MS/MS检测D₉-1-OHP 的目标离子为D₉-1-OHP的碎片离子M–H–28，m/z 198，MS/MS分析条件与1-OHP相同；

以未加标/加标尿样MS/MS谱图中m/z 189和m/z 198处质谱峰强度比值为纵坐标（Y），以1-OHP加标浓度为横坐标（X），对实验数据进行线性回归分析，得到线性回归方程Y = aX

+ b；Y ＝0时得到X的绝对值 ，此绝对值即为尿中1-OHP浓度。