[发明专利]鲇生长激素与穿肠膜肽TAT融合蛋白及制备方法和应用

权利要求书

1.一种分离重组的基因，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.一种分离重组的融合蛋白，其特征在于：其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

3.一种表达权利要求2所述蛋白的大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于：大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）pET-22b(+)-saGH-TAT，F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-)gal dcm(DE3)； CCTCC NO：M2012126。

4.权利要求2所述融合蛋白的制备方法，其步骤是：

A. 鲇生长激素基因的制备：获取鲇头部脑垂体，根据GeneBank中已经发表的鲇科鱼类GH的序列设计PCR兼并引物，以上述脑垂体提取的RNA作为模板反转出cDNA，PCR扩增目的基因saGH，PCR产物通过DNA凝胶电泳检测，回收PCR产物并将其克隆到pMD18-T载体中，挑取单菌落用碱裂解法小量提取质粒进行酶切鉴定，并进行测序，得到的阳性克隆子即为包含saGH基因的大肠杆菌，用于基因的扩增和保藏；

B.通过重叠延伸PCR的方法将TAT 33bp 碱基连入saGH 的3'端构成saGH-TAT，将PCR产物组装入pMD18-T 载体，转化大肠杆菌JM109，挑取单菌落用碱裂解法小量提取质粒进行酶切鉴定，并进行测序,得到的阳性克隆子即为包含saGH-TAT的大肠杆菌，用于基因的扩增和保藏；

C. 融合基因的制备及表达载体的构建：首先双酶切重组质粒pMD18-T-saGH-TAT和质粒pET-22b（+）, 胶回收含saGH-TAT基因的片段和开环pET-22a（+）片段，16℃连接后转化到感受态E.coli中，所得到的阳性克隆子是包含saGH-TAT融合基因的大肠杆菌；

D.基因工程菌的制备：将步骤C中制得的质粒pET-22a（+）-saGH-TAT转化到感受态BL21（DE3）中，PCR鉴定筛选出阳性转化子，所得阳性克隆即为本发明涉及的能够表达saGH-TAT的大肠杆菌基因工程菌株；

E.基因工程融合蛋白的制备：将上述基因工程菌转接到2×YT培养基中，融合蛋白saGH-TAT以包涵体的形式高效表达。

5.权利要求2所述融合蛋白在促进硬骨鱼体生长中的应用。

6.权利要求2所述的融合蛋白在增强罗非鱼耐高渗透压海水中的应用。