[发明专利]肺结核中医证候分型特征蛋白的质谱模型及其制备

权利要求书

1.一种检测肺结核中医证候分型血清特征蛋白的质谱模型，其特征在于：从血清中筛选出5个蛋白作为特征蛋白，根据选取的5个蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立肺阴虚证、阴虚火旺证及气阴两虚证肺结核患者鉴别的血清特征蛋白质谱模型，所述的蛋白质质荷比m/z值和临界峰值均值M分别为m/z=3961.7，M=3.37；m/z=4679.7，M=1.34；m/z=5646.4，M=2.01；m/z=8891.2，M₁=3.09，M₂=1.01；m/z=9416.7，M=8.35；分子量m/z误差﹤0.01%,临界峰值均值M的CV<5-10%。

2.一种检测肺结核中医证候分型血清蛋白质谱模型的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）4℃条件下2小时内收集血清标本，进行-80℃低温冷冻备用；

（2）采用WCX弱阳离子交换磁珠对所述肺阴虚证、阴虚火旺证及气阴两虚证肺结核患者的血清标本的带正电荷的蛋白进行吸附，吸附时血清标本与活化后的WCX弱阳离子交换磁珠混合置于磁性处理器上孵育，带正电荷的蛋白吸附于磁珠表面，而未吸附的蛋白被弃去； 

（3）用激光解吸/电离飞行时间质谱仪，用氮激光仪337nm和80cm或120cm飞行管分析阵列，或用电喷雾电离已洗脱的生物标志后用液相色谱质谱联用仪对结合在负离子表面的WCX磁珠上的标本血清蛋白进行读取，设定最高检测分子量为50kDa,优化分子量，范围1000-15000Da,最佳聚集中心8000Da，数据采集参数范围20-80，激光强度150-180，检测敏感度为7-8，收集总数为130次，由此获得蛋白质谱图谱；

（4）定量性质谱调控：在每次实验数据收集前，用All-in-one标准蛋白及质谱的标准化质控O型血清校正仪器，用2746±1Da、5909±1Da、6634±1Da标准峰为质谱内标定性质控标准，使蛋白质分子量误差<0.01%和临界峰值均值M的CV<5~10%，从而获得精确的蛋白质谱图谱数据；

（5）对所得数据进行单因素方差分析检验三组间的差异，采用最小显著差异法检验组与组间的差别，根据肺阴虚证、阴虚火旺证及气阴两虚证肺结核患者血清之间蛋白峰值的差异，初步分析筛选得到74个差异多肽蛋白，认定P值小于0.001时具有统计学意义；

（6）选取5个特征蛋白，以各蛋白质峰的质荷比m/z值及该蛋白的临界峰值均值M构成于检测肺结核中医证候分型蛋白质谱模型，其中所属的特异蛋白质质荷比m/z和临界峰值均值M分别为m/z=3961.7，M=3.37；m/z=4679.7，M=1.34；m/z=5646.4，M=2.01；m/z=8891.2，M₁=3.09，M₂=1.01；m/z=9416.7，M=8.35。

3. 根据权利要求1所述的一种检测肺结核中医证候分型血清蛋白质谱模型在评估肺结核中医分型、病程监控中应用。