[发明专利]1型登革热快速金标诊断试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及疾病诊断的抗原，具体说是一种用于1型登革热血清学诊断的重组抗原及其快速金标诊断试纸条。

背景技术

登革热是一种由伊蚊传播的病毒性传染病，主要流行于东南亚、美州等热带、亚热带国家和地区，一百多个国家有地方性登革热传播，每年均出现几百万病例，是全球性公共卫生问题。近年来，我国东南沿海省份常年有输入性病例报告，且由此造成的本地扩散及暴发流行越来越频繁。由于登革热主要的传播媒介-白蚊伊蚊在国内分布广泛，因此其传播速度快，容易造成不良的社会影响，同时对当地的经济发展，特别是旅游业的发展造成冲击，我国已将登革热列为重点控制的传染病之一。由于缺乏有效的登革疫苗，加强登革热实验室准确快速的检测，及时发现、控制传染源，对于控制疫情起着至关重要的作用。

目前登革热的实验室诊断主要包括病毒分离、基因诊断技术和血清学检测。由于登革热的病毒血症期很短，通常在发热前2-3天到发热开始4-5天内，因此病毒分离和基因诊断受到标本采集时间的限制，同时对设备、实验室条件及人员素质要求很高，不利于推广。传统的血清学方法主要包括血凝抑制实验、补体结合实验、中和实验和免疫荧光法。但这些方法大多敏感性和特异性不高，且操作繁烦，有的需要特殊检测设备，目前已较少应用。而ELISA法、免疫层析法具有较高的敏感性和特异性，且操作简便快速，是目前大多数实验室采用的主要方法。国外已有多个国家生产销售此类试剂盒，但大多数质量不尽人意，仅以澳大利亚Panbio公司生产的检测试剂盒质量最好，该试剂也是目前国内实验室采用的主要试剂。但其价格昂贵，一般实验室难以承受，且运送时间长，难以应对突发事件。而国内尚没有商业化的试剂盒面市。

登革病毒属于黄病毒科黄病毒属，可分为四种血清型。早期的诊断试剂盒主要采用全病毒或病毒裂解液作为捕获抗原，检测血清中的登革病毒抗体，但由于与其它虫媒病毒存在交叉反应，特异性差，已逐渐被重组抗原所替代。外膜蛋白(E蛋白)是登革病毒主要的结构蛋白，全长500个氨基酸左右，E蛋白能和宿主细胞表面受体相互作用从而在病毒入侵过程中起至关重要的作用，还能诱导宿主产生保护性的中和抗体。E蛋白可分为三个结构区(DI、DII、DIII)，DIII区包括残基300～400，由唯一的一个二硫键稳定其结构，含有多个中和表位和宿主细胞受体识别位点，能诱导病毒中和抗体和血凝抑制抗体的产生。该多肽区不仅含有群特异性表位，还含有登革病毒型特异性表位，可用于病毒血清型的鉴别。

胶体金是一种处于半还原状态的悬浮颗粒，能迅速吸附蛋白质等大分子而不影响其活性，胶体金具有易分辨的红至紫红色，在与大分子结合后，易于用肉眼识别，不需二级放大即可直接观察结果，胶体金诊断产品因而可直接进入没有复杂检测设备的诊所甚至家庭里。近年来，以早孕检测试纸为代表的胶体金免疫诊断试剂已进入千家万户，给人们的生活带来很大的方便。

从包括中国专利等有关资料检索表明，目前尚未有利用基因工程方法获得高表达、高活性的外膜蛋白DIII区重组抗原用于同时检测登革病毒感染者血清中IgM、IgG抗体的金标快速诊断试纸条的相关报道。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的是要提出一种用于1型登革热诊断的外膜蛋白DIII区重组抗原及可同时检测1型登革病毒感染者血清中IgM、IgG抗体的快速金标诊断试纸条。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一.溶液配方：

(1)重组抗原溶解液：SDS        0.1％

                   甘氨酸     250mmol/L

                   Tris.Cl    25mmol/L

(2)胶体金溶液：0.03～0.05％的四氯金酸，加1～2％柠檬酸三钠制备成胶体金颗粒；

(3)二抗：羊抗人IgG单抗、羊抗人μ链单抗，羊抗鼠IgG单抗由厦门波生生物技术有限公司研制；

(4)包被缓冲液：含1～3％蔗糖的磷酸盐缓冲液；

(5)基础缓冲液：由厦门波生生物技术有限公司研制，主要含牛血清白蛋白的缓冲液；

(6)反应缓冲液：含0.01～0.05％NaN₃的磷酸盐缓冲液；