[发明专利]黄瓜果实苦味基因Bt紧密连锁的SSR标记及其应用

权利要求书

1.黄瓜果实苦味基因Bt紧密连锁的SSR标记，序列如下：

SSR21558-F/SSR21558-R:

GTGGGGGATGTGATTCAGAC/CATCATCCATTCCCCTCAAC，其扩增的特征条带如Seq ID No.1所示和Seq ID No.2所示，

SSR20054-F/SSR20054-R:GTTTGTGAGGGAAACGCAAT/TCAAAAAGCTTCCTTCCTTCA，其扩增的特征条带如Seq ID No.3和Seq ID No.4所示。

2.权利要求1所述的SSR标记在选择无果实苦味基因Bt的黄瓜种质资源中的应用，其步骤如下：

（1）采用所述SSR标记为引物对黄瓜待选材料的基因组DNA分别进行PCR扩增，

（2）对扩增结果进行凝胶电泳检测，

（3）从凝胶电泳检测的结果中选出没有出现所述果实苦味特征条带的材料。

3.根据权利要求2或3所述的应用，所述PCR扩增的体系：GoTaq GreenMasterMix5μL（PromeGa），15nGDNA，正向、反向引物各30nG，其余以ddH₂O补足至10μL。

4.根据权利要求2或3所述的应用，PCR扩增的程序为：94℃预变性4min；94℃变性15s；55℃退火15s；72℃延伸30s；35个循环；72℃保温5min。

5.根据权利要求2～4任一所述的应用，所述凝胶电泳检测指采用6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，于160V恒电压电泳分离，最后银染显色。