[发明专利]一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基及方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤学和干细胞学研究领域，涉及一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基及方法。

背景技术

淋巴转移是肿瘤转移的重要途径之一，也是肿瘤分期的重要内容和预后的重要因素，大量临床证据表明：头颈部鳞状上皮细胞癌最终通过多循淋巴通道转移，但迄今为止，关于瘤细胞如何进入淋巴管的确切机制尚不清楚。

目前有几种分子可以作为淋巴内皮细胞的标记物：①血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)，也称作fins样酪氨酸激酶4(flt4)；②淋巴内皮透明质酸受体一1(LYVE-1)，与CD44同源，除肝细胞表达外，被作为正常或肿瘤组织淋巴管内皮特异性标记物；③podoplanin除表达于淋巴管内皮及良、恶性血管源性肿瘤细胞，其他一些非上皮细胞也有表达；④Prox-1是同源异型盒转录因子基因产物，它与胚胎淋巴管芽的生长、延伸及淋巴管内皮细胞的表型改变密切相关。目前多单独或者联合应用VEGFR-3、LYVE-1标记淋巴管。

早期研究认为，肿瘤组织内无淋巴管存在，恶性肿瘤主要是通过肿瘤边缘正常组织内的毛细淋巴管进入淋巴系统，从而造成淋巴转移。后期的研究逐步证明了在肿瘤的内部是有淋巴管的，尤其是早期即发生淋巴转移的肿瘤。头颈部鳞状上皮细胞癌是容易发生早期淋巴结转移的典型疾病，80%的患者在确诊时已经发生了转移。因此头颈部鳞状上皮细胞癌是研究淋巴转移的最佳模型。

恶性肿瘤及其转移瘤难以根治的原因在于肿瘤细胞群体的生物学异质性。异质性是指肿瘤中的不同细胞亚群，在化疗的敏感性、生长速度、对细胞因子刺激的反应、转移能力等方面存在的差异。近年的研究结果表明，肿瘤组织存在肿瘤干细胞 (Cancer Stem Cells, CSC)。CSC是具有自我更新，自我复制能力的细胞，CSC对化疗药物和放射线治疗具有很强的耐受性，并且可以分化出不同表型的肿瘤细胞和间质细胞，重建肿瘤组织的异质性。多数头颈部SCC患者在发病的早期就有淋巴结转移，推测这种肿瘤组织中的毛细淋巴管应该不是来源于患者本身的淋巴管，因为在发病早期宿主淋巴管尚未迁移至肿瘤。因此，肿瘤组织中的毛细淋巴管很有可能源自具有分化能力的CSC。CSC在微环境的协同下分化为毛细淋巴管，为肿瘤的早期淋巴转移创造条件。

为了进行CSC向淋巴管分化实验，本发明提供了一种高效的、模拟体内环境的分化诱导方法和无血清分化诱导培养液，为深入研究肿瘤的淋巴转移提供有力的支持。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基。

本发明的另一目的在于提供一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的方法。

本发明还提供了诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基的制备方法。

本发明所采用的解决方案为：

一种诱导肿瘤干细胞向淋巴管内皮细胞分化的无血清培养基，所述无血清培养基含有基础培养基、添加物，所述添加物含有的组分和用量为：

转铁蛋白 3.6～5.8mg/L、

β-巯基乙醇 0.52～0.88mg/L、

胰岛素 1.6～12.8mg/L、

牛血清白蛋白 450～600mg/L、

肝素钠 50～200μg/L、

血管内皮细胞生长因子C 20～100μg/L、

谷丙氨酸二肽400～460mg/L、

L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐9.5～12.5mg/L、

氨基乙醇0.48～1.1mg/L、

亚硒酸钠0.0017～0.002mg/L、

油酸88～126mg/L，

所述基础培养基含有的组分和用量为：

胸苷0.315～0.385mg/L、

葡萄糖 3000～3300mg/L、

次黄嘌呤1.88～2.2mg/L、

酚红钠 8.18～8.98mg/L、

所述基础培养基还含有如下组分和用量中的至少一种氨基酸：