[发明专利]转双价抗虫抗除草剂基因棉抗性鉴定杂株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种转双价抗虫抗除草剂基因（Cry1Ac+EPSPS）棉抗性鉴定杂株的方法。

背景技术

棉花品种在种植过程中,由于人为和自然（鸟、昆虫）等因素会导致品种掺杂、退化，从而影响产量，传统的改进方法是用栽培学方法提纯复壮品种的种子。二十世纪90年代中期，转Bt基因抗虫棉问世后即面临品种抗性退化下降和种子杂化问题，为此中国农业科学院棉花研究所科研人员应用卡那霉素4000mg/l稀释液在育苗期棉花长出1-2片真叶时喷施，然后根据棉花叶片是否变黄来剔除转Bt基因抗虫棉中的非转基因棉杂株（叶片黄色反应为非转基因棉杂株，叶片颜色保持绿色为转Bt基因抗虫棉），同时又可从棉花叶片黄化百分率鉴定该转Bt基因抗虫棉抗虫性的抗性级别（品种抗虫性退化程度）。转双价抗虫抗除草剂基因（Cry1Ac+EPSPS）棉是2010年问世的一个棉花上新的转双价抗虫抗草甘膦除草剂基因棉，但是目前这个新的双价抗虫抗草甘膦除草剂基因棉还缺配套专用的抗性鉴定杂株剔除剂和方法。

发明内容

本发明的目的就是提供一种鉴定准确、速度快的转双价抗虫抗除草剂基因（Cry1Ac+EPSPS）棉抗性鉴定杂株剔除方法。

本发明的转双价抗虫抗除草剂基因棉抗性鉴定杂株的方法，是将41%草甘膦异丙胺盐3.3ml/L+ 50万单位卡那霉素4000mg/L的剔除液剂，用喷雾器喷洒在转双价抗虫抗草甘膦基因（Cry1Ac+EPSPS）二叶一心期的棉苗上，喷洒药后10天逐株记载药害级别，抗虫抗除草剂性分级标准：

高抗级：95%-100%的棉苗子叶、真叶不变色，生长正常，属品种抗性无退化；

抗级：90%以上的棉苗子叶、真叶变黄，属品种抗性退化；

微抗级：80%以上的棉苗子叶、真叶变黄，局部失水萎软，属品种抗性严重退化；

不抗级：70%以上的棉苗子叶枯萎，真叶与心叶变黑枯烂，属品种已丧失抗性；

喷洒药后18天，棉苗的定性：

高抗虫抗草甘膦棉苗：药后18天子叶与真叶保持绿色不变；

抗虫抗草甘膦棉苗：药后18天子叶、真叶绿色减退泛黄；

耐虫耐草甘膦棉苗：药后18天子叶、真叶泛黄变枯后有新叶长出；

不抗虫抗草甘膦杂株棉苗：药后18天子叶黄化失绿干枯，真叶与心叶变黑，全株枯死。

本发明的转双价抗虫抗除草剂基因棉抗性鉴定杂株的方法，鉴定准确、速度快，配制剔除液剂简单。

具体实施方式

一种转双价抗虫抗除草剂基因棉抗性鉴定杂株的方法，是将41%草甘膦异丙胺盐3.3ml/L+ 50万单位卡那霉素4000mg/L的剔除液剂，用喷雾器喷洒在转双价抗虫抗草甘膦基因（Cry1Ac+EPSPS）二叶一心期的棉苗上。

剔除液剂是由以下重量百分比原料制成：草甘膦异丙胺盐0.1353%、卡那霉素4%、水余量，其制备方法是将两种药剂混合溶解于水中，使抗性鉴定杂株剔除液剂中，草甘膦异丙胺盐含量0.1353g/L，50万单位卡那霉素的药含量4000mg/L。

喷洒药后10天逐株记载药害级别，抗虫抗除草剂性分级标准：

高抗级：95%-100%的棉苗子叶、真叶不变色，生长正常，属品种抗性无退化；

抗级：90%以上的棉苗子叶、真叶变黄，属品种抗性退化；

微抗级：80%以上的棉苗子叶、真叶变黄，局部失水萎软，属品种抗性严重退化；

不抗级：70%以上的棉苗子叶枯萎，真叶与心叶变黑枯烂，属品种已丧失抗性。