[发明专利]含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及人体或动物体胃肠中草酸盐的降解领域，特别是涉及一种含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法。

背景技术

结石病每年给全球数以千万的人带来痛苦，并且导致上百亿美元的经济损失。草酸钙结石是最常见的结石，约占全部结石的75%。人体中的草酸盐主要来源于两种途径：从饮食中吸收和生理代谢产生。除极少数有原发性草酸病的病人外，正常人生理代谢产生的草酸盐一般在一定的范围内，变化不大，但从饮食中吸收的草酸盐的量却因人而异，草酸钙结石病人从饮食中吸收的草酸盐比正常人平均多 50% （参见R. Holmes 等，Urol. Res，32：311~316，2004）。体内的草酸盐主要由尿液排出体外，尿液中草酸盐排除量超出正常值即为尿草酸盐过多症，其是衡量由于尿草酸盐过量产生的尿道、膀胱及肾草酸钙结石的一个重要指标。

目前，肾结石的治疗方法包括体外冲击波破碎、微创手术或开放手术，这些方法不仅费用昂贵，还给肾脏带来创伤。结石复发率很高，对复发病人反复使用手术，会导致其肾功能衰竭。

为了预防从饮食中吸收草酸盐，病人需要终生坚持每餐服用药品或食品添加剂，因而服用的药品或食品添加剂需无副作用。柠檬酸钾是唯一经临床试验证实能抑制结石生长的预防型药物，但病人需要长年每日口服1~2克，由于服用量大，副作用强，许多人难以承受其副作用而不得不停止治疗。

人们虽然已进行一系列的努力来降低这些结石病人从食品中吸收草酸盐，下面介绍从文献中检索到的各种可能方法：

1、口服微生物，例如：多种芽孢杆菌和双歧杆菌的混合物制品，（参见申请号为00808182.4的中国专利）。该方法中的微生物制剂临床效果不明显，因为这些微生物可以不用草酸盐而生存（参见D. Goldfarb等，Clin. J. Am. Soc. Nephrol，2：745~749，2007）。

2、口服稀土金属盐，从胃肠中吸收草酸盐（参见申请号为02808557.4的中国专利）。然而，长期服用，可能有毒副作用。

3、将草酸氧化酶（参见申请号为US2006/023115的PCT申请）或草酸脱羧酶 （参见申请号为US11/833082的美国专利）制成蛋白晶体，再用戊二醛交联提高其稳定性，然后将这些晶体制成口服药剂，用于降解胃肠中的草酸盐。然而，长期服用，可能有毒副作用。

4、口服一种肠道中寄生的以草酸盐为能源物质的活细菌制剂（参见申请号为US66/99469的美国专利）。该方法中的微生物制剂非常难以制备，成本极高，效果未知。

5、草酸脱羧酶的结构、反应机理及其在自然中的分布已有详细叙述（参见D.Svedruzic等，Arch. Biochem. Biophys.，433，176~192，2005），草酸脱羧酶（EC 4. 1. 1. 2）催化的化学反应式为：

HOOC~COOH → CO2 + HCOOH。

但目前所有文献报道的草酸脱羧酶只在酸性pH下有活力，因为肠道中的pH在6.0~7.5之间，属于中性pH，因此草酸脱羧酶不适合在肠道中降解草酸盐。

目前还没有找到一种在肠道中降解草酸盐的简单有效的办法。对于尿草酸盐吸收过多的人群，尤其是那些反复生长结石的病人而言，亟需一种安全、有效、无创伤且价廉的方法来降低其食入的草酸盐，以达到预防和治疗结石的目的。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述背景技术的不足，提供一种含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，其制备的金福菇草酸脱羧酶菌粉适合口服，与传统手术方式相比无创伤，且在胃肠中能够有效降解草酸及草酸盐，减少人体或动物体从饮食制品中吸收草酸盐，能够预防或治疗尿草酸过多症及草酸钙结石；安全、无毒副作用，可长期服用；制备简便，成本低。

本发明提供的含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，包括以下步骤：A、以金福菇或其同属真菌为原料，采用液体发酵方式培养菌体，然后调节发酵液pH值到2.0~5.0之间，诱导生产草酸脱羧酶，收集发酵液与菌体；B、粉碎收集的发酵液和菌体后进行固液分离，分别得到含金福菇草酸脱羧酶的液体部分和固体部分，再分别干燥分离获得的液体部分与固体部分，即得到含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉。

在上述技术方案中，步骤B中得到的含金福菇草酸脱羧酶的干粉为粗酶干粉，通过蛋白质纯化的方法进一步纯化，即制成纯酶干粉。