[发明专利]一种戊二醛降解菌株及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属环境污染治理领域。具体涉及一种高效修复戊二醛污染土壤的菌株，同时还涉及一种高效修复戊二醛污染土壤的菌株的制备方法，还涉及一种戊二醛降解菌株在土壤环境治理中的用途。

背景技术

戊二醛是一种五碳双缩醛化合物,广泛应用于手术器械的灭菌和环境物品的消毒及食品餐具的灭菌与消毒等领域（蒋合举等，2007）。由于戊二醛本身的内在毒性或使用不当而造成的健康危害时有发生。它对皮肤、粘膜与呼吸道有刺激、对部分人群有致敏作用，并可引发气喘和炎性或纤维性肺病。各国对工作场所戊二醛浓度都作出了极限规定。如美国工作场所临界极限为0.1ppm，英国定为0.05ppm（沈伟等，2008）。我国卫生部规定，接触皮肤或黏膜的消毒剂中戊二醛含量限制为1000mg/l（卫生部，2003）。

此外，戊二醛在畜牧品方面所造成的生产和环境安全问题也很严重。作为一种畜牧生产领域常用的高效消毒剂，戊二醛在防治畜牧养殖常见病害的同时也造成了环境污染。残留在土壤中的戊二醛不仅抑制了病原微生物生长，有益微生物的繁殖和生长也受到影响（Dario Bonassi，2003）。此外，残留的戊二醛还对畜牧产品安全构成极大的威胁。

目前的环境治理主要是采用物理、化学或生物方法。化学处理方法会造成二次污染，物理吸附法仅仅是将戊二醛转移到其它的载体上，并没有从根本上清除戊二醛。而生物降解方法可将戊二醛进行无害化转化，实现彻底降解。不过，目前戊二醛污染问题尚未得到足够重视，相关技术措施尤其是生物降解方法和技术手段还不成熟，尤其是戊二醛降解菌资源还相对有限，严重影响了利用生物降解技术处理污染土壤的效果。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种戊二醛降解菌株，该菌株不仅能耐受较高浓度的戊二醛，还具有高效降解戊二醛的能力，并且性能稳定，非常适合用于治理被戊二醛污染的土壤环境。

本发明的另一个目的是在于提供了一种戊二醛降解菌株的制备方法，该方法能在较短时间内大量获得优质高效的目的菌株，并且简单易掌握，成本低廉。

本发明的再一个目的是在于提供了一种戊二醛降解菌株在戊二醛污染土壤治理中的应用，该应用能迅速、高效且彻底地降解污染土壤环境中的戊二醛，无残留，无二次污染。为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种戊二醛降解菌株的制备方法，其步骤是：

1）从华中农业大学种猪场采集土样（任意取点），称取10g加至装有90ml无菌水的三角瓶中，摇瓶培养。

2）3－5d后，取100μl土壤溶液涂布在以戊二醛为唯一碳源的无机盐固体培养基上，28℃恒温培养。

3）将以戊二醛为唯一碳源的无机盐平板上生长的单菌落挑出来，继续进行划线分离纯化，然后重新涂布到上述含戊二醛的无机盐平板上进行培养。经3次分离筛选后，最终获得对戊二醛具有稳定高效降解能力的菌株LP12，在LB斜面上保存备用。

4）鉴定结果显示LP12为氮假单胞菌（Pseudomonas azotoformans），它是革兰氏阴性杆菌，不形成芽孢，化能有机营养，严格好氧，在LB培养基中10h即可到达稳定期。

申请人将上述分离得到的氮假单胞菌（Pseudomonas azotoformans）LP12于2012年4月24日送交中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，其保藏编号为：CCTCCNO：M2012122。菌株LP12生物学和形态学鉴定

①.生物学特征：杆状细菌，专性需氧，最适生长温度20℃~28℃，菌落圆形、表面光滑、凸起、湿润，浅黄色，有光泽，直径2~3nm。

②.遗传学特性：LP12的16S rDNA序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。NCBI数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）进行序列分析结果显示该序列与氮假单胞菌的16Sr DNA序列具有97%的相似性，因此结合形态学观察和分子生物鉴定确认本发明所分离的戊二醛降解菌为氮假单胞菌（Pseudomonas azotoformans）。

③.培养条件：