[发明专利]溶血性链球菌检测用引物组及方法

权利要求书

1.一种溶血性链球菌检测用引物组，其特征在于，包括下列引物：

F3引物：CTC ACA ATC GTC TTA GTA；

B3引物：CAT AAC ACA CTG GGT TCT TGA AT；

FIP引物：

CTC TAT GAA TCG CCG GTC TAG ATG TAG ACT GCT CAT GTT GTT AGC CTG；

BIP引物：

CTT CGT GCA TGA TAG GTG GAC GTG AAT CGG GTC AAT CCT ATA GC。

2.一种溶血性链球菌的检测方法，其特征在于，具体为：

（101）对待检样品提取待检模板DNA

待检样品用增菌液进行培养，得待检增菌液，取1mL待检增菌液，7000×g离心2min，吸弃上清液；加入80μL DNA提取液，混匀后沸水浴10min，置冰上10min；7000×g离心2min，取上清液作为待检模板DNA；

（102）溶血性链球菌的环介导等温扩增

按下述LAMP反应体系，在反应管中加入相应的引物、dNTPs、ThermoPol缓冲液、MgSO₄、Bst DNA聚合酶、水，混匀，然后加入甜菜碱，最后在反应管中加入待检模板DNA，进行65℃环介导等温扩增反应60min；

LAMP反应体系为：

  组分  反应体系终浓度  F3引物  0.2μmol/L  B3引物  0.2μmol/L  FIP引物  1.6μmol/L  BIP引物  1.6μmol/L  dNTPs  1.6mmol/L  甜菜碱  0.8mol/L

  MgSO₄  8mmol/L  ThermoPol缓冲液  1×  Bst DNA聚合酶  0.16U/μL  待检模板DNA  /  去离子水  /

（103）设置空白对照、阴性对照、阳性对照

（131）空白对照：以水替代待检模板DNA另外操作步骤（102）；

（132）阴性对照：以DNA提取液替代待检模板DNA另外操作步骤（102）；

（133）阳性对照：以溶血性链球菌标准菌株模板DNA替代待检模板DNA另外操作步骤（102）；

（104）检测结果判定

（141）在各反应管中分别加入2μL显色液，轻轻混匀并在黑色背景下观察；

（142）在空白对照和阴性对照反应管液体为橙色，阳性对照反应管液体呈绿色的条件下：待检模板DNA反应管液体呈绿色，该待检样品结果为溶血性链球菌初筛阳性；待检模板DNA反应管液体呈橙色，该待检样品结果为溶血性链球菌阴性。

（143）若与上述条件不符，则本次检测结果无效，重新检测。