[发明专利]一种制备爱啡肽的方法

权利要求书

1.一种爱啡肽的制备方法，包括以下步骤：

1）固相制备肽树脂片段A：Mpa(Acm)-HArg(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-CTC树脂；

2）固相制备肽树脂片段B：NH₂-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-Sieber树脂；

3）裂解肽树脂片段A得到全保护肽片段A1：Mpa(Acm)-HArg(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-OH；

4）裂解肽树脂片段B得到全保护肽片段B1：NH₂-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-CONH₂；

5）将全保护肽片段A1与全保护肽片段B1采用液相片段缩合得到爱啡肽全保护线性肽Mpa(Acm)-HArg(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-CONH2；

6）将爱啡肽全保护线性肽在液相中采用I₂氧化形成分子内的二硫键全保护环肽：Mpa-HArg(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys-CONH₂；

7）加入含有TFA切割试剂，裂解得到爱啡肽粗肽。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：固相制备肽树脂片段A的第一步是制备Fmoc-Asp(OtBu)-2CTC树脂，制备Fmoc-Asp(OtBu)-2CTC树脂采用Fmoc-Asp(OtBu)-OH与2-CTC树脂在-5℃~10℃反应获得。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：Fmoc-Asp(OtBu)-OH与2-CTC树脂反应，得到的Fmoc-Asp(OtBu)-2CTC树脂替代度范围小于1.0mmol/g。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：固相制备片段B的第一步是制备Fmoc-Cys(Acm)-Sieber-树脂，制备Fmoc-Cys(Acm)-Sieber-树脂采用Fmoc- Cys(Acm)-OH与Seiber树脂在低温-5℃~10℃反应获得。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：Fmoc- Cys(Acm)-OH与Seiber树脂偶反应，得到的Fmoc- Cys(Acm)-Sieber-树脂替代度范围小于0.6mmol/g。

6.如权利要求1至5任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤3）裂解肽树脂片段A得到全保护肽片段A1使用切割试剂，切割试剂为20%TFE/DCM。

7.如权利要求1至5任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤4）裂解肽树脂片段B得到全保护肽片段B1使用切割试剂，切割试剂为2% TFA/DCM。

8.如权利要求1至5任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤5）全保护肽片段A1与B1采用液相片段缩合，其中缩合采用偶联剂，偶联剂为PyAOP和HOAT。

9.如权利要求1至5任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤7）中含有TFA的切割试剂为三氟乙酸、苯甲硫醚、三异丙基硅烷、二巯基乙醇和水的混合试剂，混合溶剂的配比为：三氟乙酸体积比例为82%-87%，三异丙基硅烷体积比例为2%-3%，苯甲硫醚体积比例为3%-7%、二巯基乙醇体积比例为3%-7%、余量为水。

10.如权利要求1至5任意一项所述的制备方法，其特征在于：得到的爱啡肽粗肽纯化为精肽，纯化的步骤为：第一步纯化：将合成所得粗肽经过滤后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以三氟乙酸水溶液为A 相、色谱纯乙腈为B相，进行梯度洗脱纯化；第二步纯化：将第一步纯化所得目的肽溶液浓缩后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸盐缓冲溶液为A 相、色谱纯乙腈为B相，进行梯度洗脱纯化；第三步转盐：采用反向高效液相色谱法将磷酸盐转成醋酸盐。