[发明专利]一种高效降解粪便的复合微生物菌剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种高效降解粪便的复合微生物菌剂，其特征在于，是由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975、米曲霉（Asperqillus oryzae）CICC41474、长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150、嗜热侧孢霉（Thermophilic sporotrichum）ACCC30346、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006经固体发酵制得。

2.如权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，每克复合微生物菌剂含有：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CICC10088活菌数10⁸～10¹⁰个、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）CICC20515活菌数10⁸～10¹⁰个、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC120611活菌数10⁷～10⁹个、嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）CICC22975活菌数10⁷～10⁹个、米曲霉（Asperqillus oryzae）CICC41474孢子数10⁷～10⁹个、长柄木霉（Trichoderma viride）ACCC30150孢子数10⁷～10⁹个、嗜热侧孢霉（Thermophilic sporotrichum）ACCC30346孢子数10⁷～10⁹个、细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC11006孢子数10⁷～10⁹个。

3.根据权利要求1或2所述复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将枯草芽孢杆菌CICC10088接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量接种于固体培养基A中，在30～37℃培养3~5天，制得含有枯草芽孢杆菌CICC10088活菌数8～15×10⁹个/g的固体菌剂A；

（2）将蜡状芽孢杆菌CICC20515接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将蜡状芽孢杆菌接种于固体培养基B中，在30～37℃培养3~5天，制得含有蜡状芽孢杆菌CICC20515活菌数8～15×10⁹个/g的固体菌剂B；

（3）将巨大芽孢杆菌CICC120611接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将巨大芽孢杆菌接种于固体培养基C中，在30～37℃培养3~5天，制得含有巨大芽孢杆菌CICC120611活菌数1～10×10⁹个/g的固体菌剂C；

（4）将嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975接种于LB液体培养基，在55～60℃条件下液体培养18~24h，然后按10~20wt%的接种量将嗜热脂肪地芽孢杆菌接种于固体培养基D中，在55～60℃培养3~5天，制得含有嗜热脂肪地芽孢杆菌CICC22975活菌数1～10×10⁹个/g的固体菌剂D；

（5）将米曲霉CICC41474接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到10⁸个/ml，然后按10~20wt%的接种量将米曲霉接种于固体培养基E中，在25～30℃培养5~7天，制得含有米曲霉CICC41474孢子数1～3×10⁹个/g的固体菌剂E；

（6）将长柄木霉ACCC30150接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到10⁸个/ml，然后按10~20wt%的接种量将长柄木霉接种于固体培养基F中，在25～30℃培养5~7天，制得含有长柄木霉ACCC30150孢子数1～3×10⁹个/g的固体菌剂F；

（7）将细黄链霉菌CICC11006接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到10⁸个/ml，然后按10~20wt%的接种量将细黄链霉菌接种于固体培养基G中，在25～30℃培养5~7天，制得含有细黄链霉菌CICC11006孢子数0.5～1.5×10⁹个/g的固体菌剂G；

（8）将嗜热侧孢霉ACCC30346接种于PDA固体培养基，在40～45℃条件下固体培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度到10⁸个/ml，然后按10~20wt%的接种量将嗜热侧孢霉接种于固体培养基H中，在40～45℃培养5~7天，制得含有嗜热侧孢霉ACCC30346孢子数0.5～1.5×10⁹个/g的固体菌剂H；

（9）取1～3重量份步骤（1）制得的固体菌剂A、1～3重量份步骤（2）制得的固体菌剂B、1～3重量份步骤（3）制得的固体菌剂C、1～3重量份步骤（4）制得的固体菌剂D、1～3重量份步骤（5）制得的固体菌剂E、1～3重量份步骤（6）制得的固体菌剂F、1～3重量份步骤（7）制得的固体菌剂G和1～3重量份步骤（8）制得的固体菌剂H进行混合，制得复合微生物菌剂。