[发明专利]一种检测SKA1基因表达的方法及其siRNA的用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种抑制SKA1基因表达的siRNA，该siRNA的核苷酸序列以及含有该siRNA编码DNA的重组载体，以及它们的用途。本发明还涉及了可以从组织或者细胞中有效检测SKA1基因表达的逆转录引物，以及该引物在肿瘤诊断中的应用。

背景技术

RNA干扰是指由双链RNA诱发的基因沉默现象，主要通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。研究表明，长度为21～23nt的小干扰RNA分子（small interfering RNA，siRNA）是引起RNA干扰的直接原因（Tuschl T,Zamore PD,Sharp PA,Bartel DP.RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals.Cell 2000,101:25-33.）。RNA干扰在抑制基因表达方面具有高效性、简单性和特异性，目前在基因功能研究和疾病治疗中发挥了重要作用。近几年来，RNA干扰已经在肿瘤治疗方面也取得了一些成果（Uprichard,Susan L.The therapeutic potential of RNA interference.FEBS Letters 2005,579:5996-6007）。

SKA1（The spindle and kinetochore associated complex subunit 1）基因定位于染色体18q21.1，编码含有255个氨基酸、分子量约为30kDa的蛋白。目前对SKA1蛋白结构的研究还不深入，只明确了其在N端具有卷曲螺旋结构域（Rual JF,Venkatesan K,Hao T,et al.Towards a proteome-scale map of the human protein-protein interaction network.Nature 2005;437:1173-1178.Sauer G，Korner R,Hanisch A,et al.Proteome analysis of the human mitotic spindle.Mol Cell Proteomics 2005;4:35-43.）。最初质谱分析结果表明，SKA1蛋白被确定为纺锤体的组成部分（Cheeseman IM,Brew C,Wolyniak M,et al.Implication of a novel multiprotein Dam1p complex in outer kinetochore function.J Cell Biol.2001;155:1137-1145.）。后来通过酵母双杂试验，发现了纺锤体着丝点复合物（The spindle and kinetochore associated complex，SKA）的另一个亚基SKA2，体外和体内研究结果均表明，SKA1和SKA2相互作用形成稳定的复合体，对于SKA2的稳定以及SKA蛋白在着丝点和微管中的定位是必须的（Hanisch A.,Sillje HHW，Nigg EA.Timely anaphase onset requires a novel spindle and kinetochore complex comprising Ska1 and Ska2.EMBO J.2006;25:5504-5515.）。SKA复合体对于有丝分裂至关重要，可以使所有染色体的着丝点都排列在赤道板平面上，这对于确保染色体均等分配和维持基因组稳定性十分必要。有丝分裂后期，染色体在纺锤体着丝点微管的作用下移向两极，并导致纺锤体检查点沉默，在这个过程中SKA1复合体也是必须的蛋白。然而在当时的研究中，SKA1在染色体分离中的作用并没有阐述清楚。2009年在Dev Cell和EMBO J杂志上的报道阐述了SKA1复合体在着丝点和微管界面上发挥功能，并与微管直接作用，在微管上形成低聚装配体，沿着微管以一种解聚-偶联的方式运动，参与有丝分裂期间染色体的运动（Welburn JPI,Grishchuk EL,Backer CB,et al.The human kinetochore Ska1 complex facilitates microtubule depolymerization-coupled motility.Dev Cell 2009;16:374-385.）。