[发明专利]一种检测磺胺类药物残留的胶体金试纸条及其使用方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留分析和免疫学技术领域，具体涉及一种检测磺胺类药物残留的胶体金试纸条及其使用方法和应用。

背景技术

磺胺类药物常作为饲料添加剂或动物疫病治疗药物被广泛应用，不合理的用药会导致磺胺类药物在动物性食品中的残留，影响食品安全，进而危害人类的健康，各国对在动物源性食品中的磺胺类药物残留限量做出了越来越严格的规定。

针对食品和饲料中磺胺类药物残留的检测方法包括高效液相色谱、气相色谱、高效液相色谱-质谱、气相-质谱、薄层色谱法、毛细管电泳法。胶体金免疫层析法具有快速、灵敏度高、操作简单、适应性强等优点，适合大量样品现场监测。因此更适于快速检测磺胺类药物在动物组织中的残留。

申请号为CN200610019642.1的中国发明专利公开了一种检测磺胺类药物残留的免疫胶体金试纸条；申请号为CN200810089431.4的中国发明专利公开了一种检测磺胺甲噁唑残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法；申请号为CN200910189654.2的中国发明专利公开了一种检测磺胺嘧啶残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法；申请号为CN200610019642.1的中国发明专利公开了一种磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡及其生产和使用方法。这些公开的专利方法均只能检测一种或几种磺胺类药物。申请号为CN201020579015.5 的中国实用新型专利公开了一种检测磺胺类药物残留的胶体金试纸卡，该试纸卡尽管能够检测13种磺胺类药物的残留，检测限在5-20ng/ml之间，但是对于多达20多个品种的磺胺类药物来说，还是远远不够的。

发明内容

本发明的目的在于针对目前的磺胺类药物残留检测试纸条一次性检测药物不够多的问题，提供一种能一次性检测16种磺胺类药物残留的胶体金试纸条及其使用方法和应用。

本发明是基于一种能同时识别16种磺胺类药物的高灵敏度单克隆抗体（该单克隆抗体是由杂交瘤细胞4E5分泌的，杂交瘤细胞4E5由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO:C201148），通过制备胶体金，标记纯化后的抗体，优化各项层析条件等完成的。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种胶体金试纸条，包括吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴在塑料衬板上，所述金标垫包被有胶体金标记的能识别磺胺类药物的单克隆抗体，所述检测线包被有磺胺包被原，所述质控线包被有羊或兔抗鼠IgG。

所述的能识别磺胺类药物的单克隆抗体是由杂交瘤细胞4E5所分泌的，所述杂交瘤细胞4E5于2011年6月29日送交位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，保藏号为CCTCC NO:C201148。

所述的磺胺包被原是由磺胺二甲嘧啶（SM2）与卵清蛋白（OVA）形成的偶联物（SM2-OVA）。

所述的胶体金试纸条的使用方法，包括用样品提取液对组织样品前处理和用胶体金试纸条进行检测的步骤，所述样品提取液的pH值为 7.6－8，其配制方法为：准确称取KH₂PO₄ 0.41g，K₂HPO₄ 5.59g，超纯水溶解，定容至1000mL，所述前处理的方法为：称取匀浆的组织样品1g，加入样品提取液10ml，振荡5分钟至混匀，吸取上清液。

所述组织样品为猪肉、鸡肉、牛肉、羊肉、鱼肉、虾肉、猪肝、鸡肝、鸡蛋、蜂蜜中的一种或多种。

所述的胶体金试纸条在磺胺类药物残留检测中的应用。

具体步骤如下：

（1）复苏杂交瘤细胞4E5，免疫小鼠，制备单克隆抗体，并利用辛酸硫酸铵进行纯化。

（2）利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，优化标记条件，制备胶体金标记的能识别磺胺类药物的单克隆抗体；

（3）将包被原SM2-OVA和羊或兔抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上；

（4）将待测样品用样品提取液提取，利用试纸条检测。