[发明专利]一种检测泰乐菌素和替米考星残留的胶体金试纸条及其使用方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留分析和免疫学技术领域，具体涉及一种检测泰乐菌素和替米考星残留的胶体金试纸条及其使用方法和应用。

背景技术

泰乐菌素和替米考星属于大环内酯类抗生素，在兽医临床上广泛用于治疗革兰氏阳性菌引起的肺炎、乳房炎、全身性败血症，特别是用于治疗畜禽支原体感染。此外泰乐菌素还广泛用作饲料添加剂。泰乐菌素和替米考星在动物组织中的残留，会威胁到食品安全，对人类健康造成危害。泰乐菌素和替米考星易诱导细菌产生耐药性，且耐药性可在细菌之间转移。鉴于此，欧盟在1999年禁止将泰乐菌素用作饲料添加剂(Council Regulation 2821/98，1998)，我国农业部235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》对泰乐菌素和替米考星在动物性食品中残留也规定了最高残留限量。

现有的检测泰乐菌素和替米考星残留量的方法主要包括微生物方法、仪器分析方法和免疫化学分析方法等。微生物法虽在残留筛选高通量上表现出良好的性能，但检测耗时长，缺乏特异性，且所用细菌对不同种类的抗菌药物敏感性存在差异，易导致假阴性和假阳性产生。仪器分析方法的样品前处理复杂，成本高，操作繁琐，适用于样品的确证分析，而不适用于大批量样品的筛选及现场检测。胶体金免疫层析法具有快速、灵敏度高、操作简单、适应性强等优点，适合大量样品现场监测。因此对于快速检测泰乐菌素和替米考星在动物组织中的残留，胶体金层析试纸条更具优势。

申请号为200610007286.1的中国发明专利公开了一种用于泰乐菌素残留快速检测的试纸条，可检测0.1ng的泰乐菌素残留。但该试纸条只涉及单一药物的检测，且该发明提供的样品处理方法较为复杂，判断检测结果时可能需要读条仪器，不便于现场操作。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测泰乐菌素与替米考星残留的胶体金试纸条及其使用方法和应用。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种胶体金试纸条，包括吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴在塑料衬板上，所述金标垫包被有胶体金标记的能识别泰乐菌素和替米考星的单克隆抗体，所述检测线包被有泰乐菌素包被原，所述质控线包被有羊或兔抗鼠IgG。

所述的能识别泰乐菌素和替米考星的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株P3C4所分泌的，所述杂交瘤细胞株P3C4已于2007年3月28日送交位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，保藏号为CCTCC NO:C200719。杂交瘤细胞株P3C4已在申请号为200710052663.8的发明专利中公开，公开日为2008年1月16日。

所述泰乐菌素包被原是去碳霉糖泰乐菌素－O－羧甲基羟胺－卵清蛋白偶联物（DES-AOAA-OVA）。

所述的胶体金试纸条的使用方法，包括用样品提取液对组织样品前处理和用胶体金试纸条进行检测的步骤，所述样品提取液为柠檬酸-乙腈缓冲液，其配制方法为：称取一水合柠檬酸3.992g，二水合柠檬酸三钠23.822g，去离子水溶解，定容至1000mL得檬酸缓冲液，取乙腈20mL，柠檬酸缓冲液180mL，混匀，所述前处理方法为： 称取均质后的组织样品1g，加入样品提取液9mL，漩涡1分钟，以4000转/分钟的转速，室温离心10分钟，取上清液。

所述组织样品为牛奶、鸡肉，猪肉、虾肉、牛肉、羊肉、猪肝中的一种或多种。

所述的胶体金试纸条在泰乐菌素和替米考星残留检测中的应用。

具体步骤如下：

（1）复苏杂交瘤细胞株P3C4，免疫小鼠，制备单克隆抗体，并利用辛酸硫酸铵进行纯化；

（2）利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，优化标记条件，制备胶体金标记的单克隆抗体；

（3）将包被原DES-AOAA-OVA和羊或兔抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上；

（4）将待测样品用样品提取液提取，用试纸条检测。