[发明专利]同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法

权利要求书

1.一种同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法，其特征在于包含下列步骤：

(1)取食物样本，加缓冲液碾磨制成匀浆液，离心去除加大的食物残渣，取上清得菌悬液，整过程均为无菌操作；

 (2)取制备好的菌悬液加叠氮溴化丙啶溶液，使叠氮溴化丙啶PMA的终质量浓度为3 μg/mL，混匀后室温避光培养3-8min，卤素灯曝光，光照交联时样品置于冰上，交联后的悬浮液离心，所得沉淀用沸水浴法提取DNA；

（3）所得DNA进行mPCR，体系包含总共10μl反应液，其中，4 μl 制备的模板DNA溶液，2 μl 5×buffer，每条引物的量是15 pmol，1U Taq DNA聚合酶;反应条件是：95℃ 10 min，接着40个循环（94℃ 30 s， 50℃ 30 s，72℃ 1 min），最后 72℃ 延伸10 min；

（4）mPCR 反应结束后，进行目的菌检测分析。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（1）所述的缓冲液为PBS磷酸盐缓冲液。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（2）混匀后室温避光培养5min。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（3）所述引物分别为：从5’-3’为

fliC-F:TGCGCTGAATGAAATCAACAAC

fliC-R:TAGAAACCGTACCATTACCGTC

Hat-F:ACTCAGGCTTCCCGTAACGC

Hat-R:GCTTCATACAGACCATCTTTAGTTG

stgA-F:TGCCAGGTTACGCCACAAACC

stgA-R:CGCTGTGGTATCAATCGTGC。

5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（4）所述目的菌检测分析为用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果，若有636 bp条带，则说明有鼠伤寒沙门氏菌，若有551 bp条带，则说明有乙型副伤寒沙门氏菌，若有354 bp条带，则说明有伤寒沙门氏菌菌。