[发明专利]食品和饮料中大蒜成分快速检测试剂盒的制备和检测方法

权利要求书

1.一种大蒜成分快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)-(4)：

(1)2×PCR Master Mix

包括0.05u/μL Taq DNA聚合酶，反应缓冲液，4mmol/L氯化镁，0.4mmol/L dNTP(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)；

其中反应缓冲液含有20mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾和2％曲拉通X-100；

(2)上游引物：10μmol/L，序列为：5′-GGAAATGCTGCGAACTATGTGA-3′；

(3)下游引物：10μmol/L，序列为：5′-TTGATTGGGCTGTAATGAGGC-3′；

(4)Taqman探针：10μmol/L，序列为：5′-TGGCAAGGAGACCTTCTGGGTTGTTAGG-3′，其5′端标记FAM报告荧光集团，3′端标记TAMRA淬灭荧光集团。

2.一种使用如权利要求1所述的试剂盒快速检测大蒜成分的方法，其特征是依次包括下列步骤：

(1)待检样品DNA的提取；

(2)大蒜成分的实时荧光PCR扩增：

A.在PCR反应管中加入如权利要求1所述的2×PCR Master Mix 12.5μL，上游引物和下游引物各1-2μL，Taqman探针0.5-1μL，100ng/μL待测样品的DNA 1-2μL，补充双蒸水至25μL，混匀；

B.将PCR反应管放入荧光PCR仪，按下述反应条件完成PCR扩增：

94-95℃ 5min，1个循环，预变性；

94-95℃ 10-20sec；60℃ 20-40sec，45个循环，PCR扩增；

(3)应用荧光定量PCR仪随机软件，分析扩增结果。