[发明专利]一种肿瘤疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗，尤其涉及一种肿瘤疫苗。

背景技术

近年来，肿瘤作为一种严重威胁人们生命的疾病，其治疗方法已成为众多科研工作者致力于研究的课题，除了人们通常所知的化疗、手术切除等治疗方法，肿瘤疫苗作为一种新型治疗手段已引起越来越多的关注。

肿瘤疫苗主要通过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。肿瘤疫苗根据其来源可分为肿瘤细胞疫苗、基因疫苗和多肽疫苗等。肿瘤细胞疫苗是从机体肿瘤组织中提取肿瘤细胞，灭活处理后使肿瘤细胞丧失致瘤性，但仍保持其免疫原性，然后对机体进行免疫；基因疫苗主要是将肿瘤抗原的基因装入DNA表达载体（通常是病毒DNA），将重组的载体注射机体后，表达肿瘤抗原蛋白对机体进行免疫；多肽疫苗是按照病原体抗原基因中已知或预测的某段抗原表位的氨基酸序列，通过化学合成技术制备成疫苗，然后注射机体进行免疫。

然而上述疫苗多数仅进入临床试验阶段，而没有进入临床使用阶段，存在的主要问题有：将DNA导入到特定细胞进行表达这一技术尚不成熟，并且使用外源DNA的安全性问题尚未解决；由于肿瘤细胞呈现高度异质性，属于同一类型肿瘤的多个瘤细胞上可以表达不同的抗原，由一种肿瘤抗原(例如：多肽疫苗所使用的抗原)所激活的T细胞只能杀伤一部分的肿瘤细胞，不表达该抗原的瘤细胞则不能被杀伤；肿瘤细胞疫苗虽然可以包含几乎全部的肿瘤抗原，但目前的研究表明其激活T细胞的作用有限，将其作为疫苗的效果并不理想。

因此，如何提供一种肿瘤疫苗，不存在使用安全性问题并且能对几乎全部的肿瘤抗原有效，成为有待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种细胞囊泡在制备肿瘤疫苗中的应用，将源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡作为肿瘤疫苗的抗原，从而利于解决肿瘤疫苗不能对全部的肿瘤抗原有效，靶向性差以及使用安全性的问题。

本发明还提供一种肿瘤疫苗，采用源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡提供抗原，所得到的肿瘤疫苗包含的肿瘤抗原谱广泛、全面，也利于提高临床治疗的靶向性和安全性。

本发明还提供了一种肿瘤疫苗的制备方法，实现了将源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡作为疫苗实体制备肿瘤疫苗。

本发明提供一种细胞囊泡在制备肿瘤疫苗中的应用，所述细胞囊泡为源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡。

作为本领域的基础知识，细胞是由细胞膜包裹细胞内容物构成，而细胞膜是由磷脂双分子层中间镶嵌蛋白质分子所组成，其球状结构则通过细胞内被称为细胞骨架的蛋白纤维丝所形成的向心牵拉力得以维持。当细胞受到外界因素（例如：紫外线等）刺激细胞发生凋亡时，细胞骨架附着细胞膜部位的部分蛋白纤维丝断裂或失去附着，向心牵拉力突然消失，使得局部细胞膜结构在外向拉力作用下，向外膨胀、突出并包裹细胞内容物以囊泡形式释放到细胞外的介于细胞和分子之间的亚层次结构中，可以形成一种基本呈纳米级的微颗粒，即本发明所述的“细胞囊泡”。

肿瘤疫苗在基体内的主要作用是诱导肿瘤特异性的T细胞的产生和活化，实现上述作用的基本过程包括：抗原提呈细胞(如:树突状细胞)摄取并加工肿瘤抗原，然后将该肿瘤抗原提呈给肿瘤特异性的T细胞，后者在识别肿瘤抗原后被激活并扩增，达到肿瘤部位，对基体的肿瘤细胞进行特异性杀伤。其中抗原提呈细胞对肿瘤抗原的有效摄取是完成上述过程的前提，由于抗原提呈细胞(如:树突状细胞)在摄取外来物时，对体积大小有严格要求，体积较小的多肽分子，以及体积较大的整个肿瘤细胞都难以被抗原提呈细胞摄取。细胞囊泡通常可以界于100-1000纳米，非常适合被抗原提呈细胞(如:树突状细胞)摄取，利用这样的细胞囊泡制成肿瘤疫苗，进入机体后，能够容易地被抗原提呈细胞捕获，使得肿瘤抗原能够被有效提呈给肿瘤特异性T细胞，并激活这些T细胞，同时由于本发明使用的细胞囊泡可以包含其肿瘤细胞源的几乎全部的肿瘤抗原(所述“全部的肿瘤抗原”指一种类型肿瘤中所有肿瘤细胞的抗原)，从而能对患有癌症个体的所有肿瘤细胞进行广泛的杀伤，同时也能对有肿瘤发生趋势的个体进行免疫，使对所有肿瘤抗原具有抵抗力，预防肿瘤的发生。

本发明采用源自凋亡肿瘤细胞的细胞囊泡作为肿瘤疫苗的抗原，所述细胞囊泡推荐的是源自于与所要杀伤或预防的肿瘤细胞同种类型的肿瘤细胞，这些肿瘤细胞例如可以是商购可获得的肿瘤细胞系。使用细胞囊泡的肿瘤疫苗相比于使用外源性DNA载体或氨基酸序列的肿瘤疫苗，能降低对机体的毒副作用。