[发明专利]用于检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留分析和免疫学技术领域，具体涉及一种能识别阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的单克隆抗体和一种用于检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留的酶联免疫方法（ELISA）及试剂盒。

背景技术

阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂属于有机胂类兽药，具有苯胂酸的基本结构，广谱抗菌，对多种肠道致病菌有较强的抑制和杀灭作用，同时对防止猪腹泻、鸡球虫、黑头病有良好的效果，在畜牧生产中广泛用作猪和鸡的饲料添加剂。

有机胂类为一种毒性很低的化合物，吸收率低，代谢和排泄快，组织中残留较少，毒副作用表现为食欲不振、体重减轻、神经麻痹、腹泻和共济失调，有时出现各种类型的皮炎，甚至有可能使部分家畜死亡。由于该类药物在畜禽养殖中广泛使用，大量的含砷的化合物进入环境中，造成土壤和水体污染，含砷化合物在环境中有较强的蓄积、迁移和转化能力，进入食物链后，直接或间接对人类健康造成的危害。鉴于此我国农业部235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》对有机胂药物在动物性食品中残留制定了最高残留限量。现有的阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留量的方法主要是仪器分析法，其中液相色谱法（HPLC）是可食性动物产品和饲料中有机胂残留检测应用最广泛的方法。仪器分析方法虽然灵敏、准确、分离度高并且可进行多残留检测的定性、定量研究，但是需要昂贵的仪器、繁琐的前处理、熟练的专业操作员。如果采用仪器分析法进行大批量样品的检测，其成本将非常高；而且在目前的国家检测机构中大部分只有省市级才配备有精密的分析仪器，因此需要建立一个从筛选到确证的检测体系。有关有机胂的残留确证方法已经相对完善，但可用于大批量样品初筛的检测方法研究较少，免疫化学分析法特别是酶联免疫吸附分析技术具有快速、灵敏度高、操作简单、适应性强等优点，适合高通量样品筛选，因此对于快速检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂在动物组织中的残留，ELISA方法更具优势。

申请号为201010100397.3的中国发明专利公开了一种检测洛克沙胂残留的免疫胶体金试纸条及其制备方法，该专利利用洛克沙胂重氮化后与人血清白蛋白（HSA），卵清蛋白（OVA）偶联，制备人工抗原后通过单克隆抗体技术得到对洛克沙胂具有特异性的抗体，通过胶体金标记，制备免疫层析试纸条。该产品只能用于洛克沙胂的检测（500μg/L消线），不能对多种有机胂药物进行残留监控。

发明内容

本发明的目的为：

（1）提供一种能识别阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂的单克隆抗体；

（2）提供所述单克隆抗体在制备阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留检测酶联免疫试剂盒中的应用；

（3）提供一种含有所述单克隆抗体的酶联免疫试剂盒；

（4）提供所述酶联免疫试剂盒在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留检测中的应用；

（5）利用该单克隆抗体，建立一种能检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留的ELISA方法；

（6）提供一种所述的ELISA方法在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留检测中的应用。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种鼠源单克隆抗体，能识别阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂，其特征在于：它是杂交瘤细胞株4F2所分泌的。

所述的杂交瘤细胞株4F2，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:C201248。

所述的单克隆抗体，其特征在于，它是以阿散酸（ASA）与亚硝酸钠重氮化后的偶氮化合物（DIA-ASA）与牛血清白蛋白（BSA）偶联得到的偶联物（DIA-ASA-BSA）作为免疫原制备得到的。

所述的单克隆抗体在制备检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留的酶联免疫试剂盒中的应用。

包含所述的单克隆抗体的试剂盒。

所述的试剂盒是检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留的酶联免疫试剂盒。

所述的试剂盒在阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留检测中的应用。

一种检测阿散酸、硝苯胂酸和卡巴胂残留的酶联免疫方法，包括免疫原、包被原和抗体的制备，其步骤如下：

（1）将阿散酸与亚硝酸钠重氮化后的偶氮化合物（DIA-ASA）与牛血清白蛋白（BSA）偶联得到免疫原（DIA-ASA-BSA）；

（2）将阿散酸在戊二醛（glutaraldehyde, GA）作用下与卵清蛋白（OVA）偶联得到包被原(ASA-GA-OVA)；

（3）用步骤（1）的免疫原制备得到保藏号为CCTCC NO:C201248的杂交瘤细胞株4F2；