[发明专利]利用植物病毒载体进行miRNA靶标模拟序列构建和表达的方法有效
| 申请号： | 201210174886.2 | 申请日： | 2012-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN102703500A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 刘玉乐;汤旸;沙爱华 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C12N15/83 | 分类号： | C12N15/83;C12N15/66;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 100084 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 植物 病毒 载体 进行 mirna 靶标 模拟 序列 构建 表达 方法 | ||
1.构建miRNA靶标模拟序列表达载体的方法，包括如下步骤：
1）化学合成编码所述miRNA靶标模拟序列的双链DNA分子，所述双链DNA分子的两端均带有限制性内切酶粘性末端或平末端；
2）将所述双链DNA分子插入载体的所述限制性内切酶位点间，得到表达所述miRNA靶标模拟序列的重组表达载体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述miRNA为序列表序列2所示的miRNA158或序列表序列3所示的miRNA172。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述载体为植物病毒表达载体。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述植物病毒表达载体为序列表序列1所示的植物病毒表达载体pTY102。
5.一种抑制植物miRNA表达量的方法，包括将使用权利要求3或4所述方法得到的重组表达载体导入所述植物中，使所述植物中所述miRNA靶基因的表达量升高。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：当所述植物病毒表达载体为所述植物病毒表达载体pTY102时，所述植物为烟草脆裂病毒的宿主植物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述烟草脆裂病毒的宿主植物为烟草。
8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：当所述miRNA为miRNA158时，所述miRNA靶基因为BP525786和/或DV159037，当所述miRNA为miRNA172，所述miRNA靶基因为NbAP2-like。
9.序列表序列1所示的植物病毒表达载体pTY102。
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