[发明专利]大白菜eIF4E.a突变位点特异性分子标记及其应用有效
| 申请号： | 201210173466.2 | 申请日： | 2012-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN102703445A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 刘栓桃;赵智中;卢金东;李巧云;张志刚 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院蔬菜研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 杨琪 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大白菜 eif4e 突变 特异性 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种大白菜eIF4E.a突变位点特异性分子标记，其特征在于：与野生型位点检测相关的标记命名为ASM-4E.a-s，片段大小384bp，如SEQ ID No.1所示；对应的突变位点检测相关的标记命名为ASM-4e.a-s，片段大小383bp，SEQ ID No.3所示。
2.一种大白菜eIF4E.a突变位点特异性分子标记，其特征在于：与野生型位点检测相关的标记命名为ASM-4E.a-lc，片段大小348bp，如SEQ ID No.2所示；对应的突变位点检测相关的标记命名为ASM-4e.a-lc，片段大小347bp，SEQ ID No.4所示。
3.权利要求1或2所述的大白菜eIF4E.a突变位点特异性分子标记的引物，其特征在于：引物序列如下：
正向引物FW：5'-GAAGCTCCTTACGATCCGTCTTCAC-3'；
正向引物Fm：5'-GGAAGCTCCTTACGATCCGTCTTCT-3'；
反向引物RWm：5'-TGGCACAGATAGGATCCTCCCAC-3'；
如SEQ ID NO.5、6、7所示。
4.权利要求1或2所述的大白菜eIF4E.a突变位点特异性分子标记在鉴别大白菜eIF4E.a基因位点的基因型中的应用。
5.权利要求3所述的引物在鉴别大白菜eIF4E.a基因位点的基因型中的应用。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：具体应用方式为：利用（FW+RWm）组合和（Fm+RWm）组合这两套引物组合，对待测个体的基因组DNA进行两次PCR扩增，检测扩增片段的有无，如果（FW+RWm）组合扩增出384bp或348bp的条带，则为野生型，扩不出则为突变型；如果（Fm+RWm）组合扩增出383bp或347bp的条带则为突变型，扩不出则为野生型；如果两个组合都能扩出条带则为杂合型。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增具体为：在20μl反应体系中，包含1×TransStart FastPfu buffer；20ng的基因组DNA；0.4μM正反向引物；0.25mMdNTPmix;1个单位的TransStart FastPfu DNA聚合酶；
PCR循环条件：95℃预变性5分钟;接着是95℃变性30秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸40秒，35-38个循环，最后72℃延伸10分钟。
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