[发明专利]菊花生长素响应蛋白Aux/IAA 编码基因CmIAA1 及其植物表达载体和构建方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及菊花生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1及其植物表达载体和构建方法。 

背景技术

菊花（Chrysanthemum morifolium Tzvel.）是菊科菊属植物，原产我国，因其花型丰富、花色多变、易于栽培等特点，而深受我国及世界各国人民的喜爱，是我国十大传统名花和世界四大切花之一。上述菊花的特点是植物高度进化的表现。同一个物种，为什么能有这么多不同类型的差异？这些现象的出现其实都与植物细胞的分裂分化有关，因此，探索导致菊花细胞如此分裂分化的相关机理则是解释这些现象的关键所在。 

生长素是最重要的植物激素之一，对在多个水平调控的植物的生长发育，如在植株水平促进顶端优势与侧根发生；细胞水平控制细胞伸长、分裂和分化；分子水平调控生长素快速响应基因的表达（Hagen G et al.，2001）。生长素信号途径由多基因参与，其中，ARF家族和Aux/IAA家族（Woodward AW et al.，2005；Quint M et al.，2006）是生长素信号途径中的两个重要转录因子。生长素响应因子（Auxin response factor，ARF）是调节生长素响应基因表达的转录因子，是早期响应生长素的基因之一。Aux/IAA蛋白最早分离于大豆（Tiwari SB et al.，2003），通过自身蛋白二聚化或与ARF蛋白发生二聚结合，从而调控其它基因的表达和调控（Jain M.et al.，2009）。目前，已从玉米、高粱、蓖麻等多个物种中克隆了Aux/IAA家族成员。 

[1]Hagen,G.and Guilfoyle,T.J.(2001).Auxin-responsive gene expression:Genes,promoters,and regulatory factors.Plant Mol.Biol.in press. 

[2]Woodward AW,Bartel B.(2005)A receptor for auxin.(2005)Plant Cell,2005,17(9):2425–2429. 

[3]Quint M,Gray WM(2006).Auxin signaling.Curr Opin Plant Biol 9:448–453 

[4]Tiwari SB,Hagen G,Guilfoyle T.(2003).The rolesof auxin response factor domains in auxin-responsive transcription.Plant Cell,2003,15(2):533-543. 

[5]Jain M,Khurana JP(2009)Transcript profiling reveals diverse roles of auxin-responsive genes during reproductive development and abiotic stress in rice.FEBS J 276:3148–3162. 

发明内容

本发明为生长素信号途径的完善，提供一个新的菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1。 

本发明还提供该生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1的植物表达载体及其构建方法。 

本发明的技术问题可通过如下技术方案解决： 

菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1，该基因的序列为SEQ ID NO.1。 

菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1的克隆方法如下： 

以提取的‘钟山紫桂’幼嫩叶片为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，设计引物扩增CmIAA1基因， 

上游引物CmIAA1-F:5′-ATGACATCCTTTGACG-3′（SEQ ID NO.2） 

下游引物CmIAA1-R:5′-GCTTCTGTTCTTGCATTTCTC-3′（SEQ ID NO.3） 

以反转录的cDNA为模板，进行聚合酶链式PCR反应，产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，进行序列测定，序列如SEQ ID NO.1所示。