[发明专利]检测PJVK基因c.437G>A突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及用于检测PJVK基因突变基因的试剂盒；本发明还涉及PJVK突变基因及其在诊断和/或治疗感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍中的应用。

背景技术

听神经病/听神经病谱系障碍(Auditory Neuropathy Spectrum Disorders,ANSD)是一种耳蜗外毛细胞功能正常，但声音信号不能同步地从内耳传输到大脑的听觉障碍性疾病，系听觉信息传输处理过程的异常。听力学检查表现为以低频听力减退为主的听力损失，听性脑干反应不能引出，耳蜗微音电位和耳声发射多正常。该类疾病于上个世纪90年代被定义和命名，是一种新认识的听力障碍性疾病，在高危婴幼儿中的发病率约为0.23%,在各种原因所致的ABR异常的聋病患儿中发病率则高达11%,是导致婴幼儿和青少年言语交流障碍的重要听力障碍性疾病之一。然而，其病因、病变部位和发病机制尚不十分明确，导致药物治疗、佩戴助听器及人工耳蜗植入术效果的预测和评估上存在难度。近几年来，一系列感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍相关基因的发现，从分子水平揭示了听神经病谱系障碍的病理机制。根据不同基因导致的不同病变部位对听神经病谱系障碍进行分型，可为听神经病谱系障碍的临床治疗提供理论依据。

Starr教授等根据发病部位的不同将其分为TYPE I型（病变部位在听神经）和TYPE II型（病变部位在内毛细胞、末梢树突及突触）国内外研究显示携带OTOF基因突变的听神经病谱系障碍患者临床多以TypeII型表现为主，适合于人工耳蜗植入并可取得较好效果。而携带PJVK基因突变的听神经病谱系障碍患者临床多以TYPE I型为主，其病变部位在听神经，位置深在，人工耳蜗植入术效果欠佳。

PJVK基因是与非综合征型隐性遗传性感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍相关的基因。由Del maghani等于2006年首次发现并命名,也称为DFNB59基因,位于染色体2q31.1～2q31.3区域,DNA序列全长9800bp,含有7个外显子,其中第一个外显子为非编码外显子。该基因的编码区序列，含终止子如SEQ ID NO.1所示，编码由352个氨基酸组成的蛋白pejvakin（如SEQ ID NO.2所示）,其中第249～258位氨基酸形成核定位信号基序(nuclear localization signal,NLS),第305～331位氨基酸形成一种可以与DNA相互作用的锌指结构(zinc-binding domains)。Pejvakin蛋白主要表达于耳蜗Corti器、螺旋神经节细胞以及前三级听觉传入通路(耳蜗核、上橄榄复合体、下丘)的神经元细胞中，所致感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍的病变部位主要位于听觉传导通路，影响动作电位的传导及细胞内物质交换。自2006年首次发现并报道PJVK基因至今,学者们分别在伊朗、摩洛哥、土耳其及荷兰等患者中发现了该基因的10余种突变，但少见我国感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍患者该基因的突变报道。申请人所在课题组针对150名感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍患者率先开展了该基因的筛查，并发现我国人群特有的c.437G>A突变，进而研发了检测该基因c.437G>A突变的试剂盒。该成果有助于快速、高效地在更大范围的感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍人群中进行突变位点的检测，进而对其定位分型，为感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍患者开展临床干预提供重要的指导意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供用于检测PJVK突变c.437G>A基因的试剂盒，其技术方案为：

一种用于检测与感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍相关的位于PJVK基因的c.437G>A突变的试剂盒，所述试剂盒包括：

从待测样品中提取DNA的试剂；

用于扩增样本DNA的PCR反应试剂；

对PCR扩增产物进行测序的试剂；

其中，所述扩增样本DNA的PCR反应试剂包括PCR引物，所述PCR引物扩增的目标片段包含PJVK基因第437位碱基。

具体地，上述PCR引物为选自：

PJVK-4F-1（SEQ ID NO.3）:5’-CAAATAGAGTCCCCTTCAACAG-3’，

PJVK-4R-1（SEQIDNO.4）:5’-CTCCAGTATGCACGTAATTTCA-3’；

PJVK-4F-2（SEQ ID NO.5）:5’-TGGCTCTACACACATTTGCT-3’，