[发明专利]一种琼脂扩散法检测鸭黄病毒抗体的方法无效
| 申请号： | 201210171724.3 | 申请日： | 2012-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN102914647A | 公开（公告）日： | 2013-02-06 |
| 发明（设计）人： | 王桂军;王汉清;张洪辉;刘雪兰;李槿年;李郁;魏建忠;杨德康;倪欣涛;李宁 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/559 | 分类号： | G01N33/559 |
| 代理公司： | 安徽省合肥新安专利代理有限责任公司 34101 | 代理人： | 何梅生;王伟 |
| 地址： | 230036 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 琼脂 扩散 检测 鸭黄 病毒 抗体 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种琼脂扩散法检测鸭黄病毒抗体的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
（1）无菌采集感染鸭黄病毒的病鸭卵巢病变组织，将其研磨匀浆后反复冻融三次，12000r/min离心10min；无菌条件下取其上清液，将上清液经0.22um微孔滤膜过滤除菌后接种10日龄SPF（即无特定病原体）鸡胚，0.2mL/枚，于38℃孵化箱孵育，弃去24小时内接种死亡的鸡胚，收获48小时至120小时内死亡鸡胚尿囊液，连续传至5代，收获病毒尿囊液；将第5代黄病毒尿囊液经3‰甲醛混合摇匀，于37℃摇床内灭活36小时，得到鸭黄病毒琼扩抗原；
（2）用pH值为7.2，浓度为1/15M的PBS缓冲液配制1%琼脂糖凝胶，制备琼扩平板，琼脂糖凝胶厚度在4.8mm～5.2mm之间，用七孔梅花打孔器打孔；将制备的琼扩抗原加入中间孔，其加入量为每孔25微升；将待检测的琼扩抗体按2倍稀释后的浓度依次加入周围六孔，即加入六孔的琼扩抗体的浓度分别是原琼扩抗体浓度的2-1,2-2,2-3,2-4,2-5，2-6；将琼扩平板于37℃湿盒中反应15小时后观察，读取琼扩效价。
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