[发明专利]一种RTN4B多肽、其单抗、产生单抗的杂交瘤细胞株及他们的制备与应用

说明书

本发明涉及一种RTN4B多肽、其单抗、产生单抗的杂交瘤细胞株及他们的制备与应用。本发明的RTN4B多肽，含有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列。本发明还进一步公开了利用所述RTN4B多肽制备的单克隆抗体、产生单抗的杂交瘤细胞株以及他们在肿瘤治疗或预防中的相关应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种RTN4B相关多肽、其单抗、产生单抗的杂交瘤细胞株及他们的制备与应用。

背景技术

RTN4B属于reticolon家族（RTNs），因含有特殊的内质网定位而得名，具有保守的RHD结构框（reticulon-homology domain）。该家族含有四个基因，RTN1、RTN2、RTN3和RTN4，其中关于RTN4的研究报道较多。RTN4（又名Nogo/ASY/RTN-X）基因有多个可变剪接本，主要编码RTN4A（GenBank登录号AF148537），RTN4B（GenBank登录号AF148538）和RTN4C（GenBank登录号AF087901）三种蛋白，其它一些剪接本多在睾丸中特异性表达。

RTN4B在正常组织中广谱表达，且研究发现RTN4B与肿瘤的发生发展密切相关。首先RTN4B参与肿瘤细胞的凋亡调控。Tsujimoto等人发现RTN4B能够和Bcl-2，Bcl-xL相互作用并将Bcl-XL及Bcl-2招募到内质网上，逆转Bcl-XL及Bcl-2的凋亡抑制作用。Yutsudo等人发现RTN4B在小细胞肺癌的样本中出现转录抑制，而过量表达RTN4B可以显著促进肿瘤细胞的凋亡。其次，近年来的报道进一步发现RTN4B很可能与血管重建、甚至血管新生有关。2004年，Acevedo,L等人发现RTN4B在哺乳动物血管内皮细胞和平滑肌细胞中都有表达。RTN4B重组蛋白可以促进血管内皮细胞的迁移并抑制平滑肌细胞的迁移。其次，RTN4A/B基因敲除小鼠在血管损伤后出现了异常加厚的血管壁，血管内腔缩小。再次，通过腺病毒载体将RTN4B重新导入到小鼠体内，这种异常增厚的血管壁又能够恢复正常的形态。因此，RTN4B很可能是哺乳动物维持血管形态，调节血管重建的关键分子。随后，该小组进一步鉴定了RTN4B在内皮细胞表面的受体分子，NgBR。敲减实验证明NogoB和NgBR之间的相互作用是VEGF血管源性分子诱导血管新生所必需的。Miao等人在斑马鱼中则进一步证明NogoB-NgBR的相互作用能够通过激活细胞内的Akt通路调控血管新生。

发明内容

本发明的目的是提供一种RTN4B相关多肽、其单抗、产生单抗的杂交瘤细胞株及他们的制备与应用。

本发明第一方面公开了一种分离的RTN4B多肽，含有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或其保守型变异多肽。

SEQ ID NO:1：DEDEDLEELEVLERK。

本发明的所述RTN4B多肽是以序列为SEQ ID NO:2的RTN4B蛋白为基础设计的。所述分离的RTN4B多肽至少应包括RTN4B蛋白全长的第44-58位氨基酸残基。所述RTN4B蛋白全长373个氨基酸，其序列如SEQ ID NO:2所示。

SEQ ID NO:2：

MEDLDQSPLVSSSDSPPRPQPAFKYQFVREPEDEEEEEEEEEEDEDEDLEELEVLERKPAAGLSAAPVPTAPAAG

APLMDFGNDFVPPAPRGPLPAAPPVAPERQPSWDPSPVSSTVPAPSPLSAAAVSPSKLPEDDEPPARPPPPPPAS

VSPQAEPVWTPPAPAPAAPPSTPAAPKRRGSSGSVVVDLLYWRDIKKTGVVFGASLFLLLSLTVFSIVSVTAYIA