[发明专利]一株产甘草苷的甘草内生真菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株内生真菌。

背景技术

甘草为乌拉尔甘草(G.uralensis Fisch)，胀果甘草(G.inflate Bat)和光果甘草(G.glabra L)的干燥根和根茎，国家二级保护植物。甘草是一种补益中草药，具有很多生理活性，如抗癌、抗变态、抑制SARS病毒以及抑制艾滋病毒等特殊功效。其主要成分甘草苷是一种黄酮类成分，具有解痉、抗溃疡、抑制酪氨酸酶活性、清除氧自由基的功效，还有抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等作用。实验研究表明，植物与内生真菌在相互作用的过程中，有内生真菌能产生与植物相同或相似的活性物质，因此从药用植物中分离到产生活性物质的内生真菌已成为当今学者的研究趋势。

发明内容

本发明提供了一株产甘草苷的甘草内生真菌。

本发明产甘草苷的甘草内生真菌，它为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2012048，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日；它在PDA固体培养基上培养7d后，菌落直径为3～5cm，中心凸起，菌落为深绿色，基质为灰绿色，易生深绿色孢子，菌落边缘整齐呈白色，紧贴培养基，分生孢子聚成绳索状的菌索，分生孢子梗直立，锥形，直接长在菌丝细胞上，基部附近偶分枝，有隔膜，分生孢子单生，单细胞。

本发明产甘草苷的甘草内生真菌，它为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4，其ITS序列提交至NCBI网页，通过Blast搜索与所得到的序列相似性高的序列，并通过所构建系统进化树，内生真菌RP4的ITS序列与(Acremonium dichromosporum，编号AB540572.1)菌株的相似性都达到了98％以上，结合形态学观察结果，确定内生真菌RP4为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)。

本发明产甘草苷的甘草内生真菌，它为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2012048，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日。

本发明利用微生物制药手段提取分离野生甘草健康植株的内生真菌，以抑菌活性为指标，采用滤纸片法进行抑菌实验，筛选得到抑菌活性较强的RP4，采用HPLC法为分析甘草内生真菌RP4的发酵液，结果在内生真菌RP4的发酵液中发现含有甘草苷，说明内生真菌RP4为产甘草苷的内生真菌。最后将获得的RP4菌株通过形态学观察和18S rDNA序列分析鉴定其种属。

本发明甘草内生真菌RP4为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)，其代谢物具有较好的抑菌活性，同时从其代谢物中发现其含有甘草苷，本发明对采用甘草内生真菌RP4生产甘草苷具有指导意义。

附图说明

图1为具体实施方式一中枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4的菌落形态图；

图2为具体实施方式一中枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4的孢子显微结构图；

图3为具体实施方式一中枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4基因组DNA的电泳图，其中M泳道表示Marker，G泳道表示RP4；

图4为具体实施方式一中枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4的PCR扩增产物的电泳图，其中M泳道表示Marker，G泳道表示RP4；

图5为具体实施方式一中枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4的系统进化树；

图6为具体实施方式一中甘草苷对照品的HPLC色谱图，其中a表示甘草苷；

图7为具体实施方式一中供试品RP4的HPLC色谱图，其中a表示甘草苷；

图8为具体实施方式一中加入对照品后供试品RP4的HPLC色谱图，其中a表示甘草苷；

图9为具体实施方式一中空白对照品的HPLC色谱图。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式产甘草苷的甘草内生真菌，它为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M2012048，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日。