[发明专利]一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法

权利要求书

1.一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于按照下述步骤进行：以米曲霉为出发菌株，进行试管扩大培养、液体摇瓶培养、一级种子培养和固体发酵培养，得到含有木质素过氧化物酶的米曲霉固体发酵物,然后进行提取得到含有木质素过氧化物酶粗品。

2.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的菌种是任何一种米曲霉菌种，如中国普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）、中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)、中国工业微生物菌种保藏管理中心 (CICC)、中国医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC)、国家兽医微生物菌种保藏中心 (CVCC)和抗生素菌种保藏管理中心等等保藏的菌种。

3.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的含有木质素的农作物秸秆原料是任意一种秸秆，如玉米秸秆、稻草秸秆、麦秸秆、高粱秸秆、大豆秸秆、棉花秸秆等等所有含有木质素的农作物秸秆，秸秆首先经过粉碎，过20～100目的筛。

4.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的试管扩大培养工艺中，其扩大培养基为马铃薯蔗糖培养基。

5.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的液体摇瓶培养和一级种子培养的培养基均为：葡萄糖5～30克，酒石酸铵0.1～5克，苯甲醇0.2～3克，硫酸镁0.2～1克，吐温80 0.5～10克，磷酸二氢钾2～9克，邻苯二甲酸3～18克，加水定容到1升，pH 5～8克，120～140℃灭菌20～40分钟。

6.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的摇瓶培养工艺条件为，接种一环米曲霉试管斜面孢子于装有体积比16～48%培养基的三角瓶中，在转速：150转/分，25～35℃，培养24～72小时；在进行摇瓶培养之前，首先将米曲霉菌种接入新配置的马铃薯蔗糖培养基中进行培养，培养温度25～35℃，培养时间48～144小时；4～10℃保存备用。

7.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的一级种子培养工艺为，按1～20%（体积比）的接种量将摇瓶培养种子液接种到一级种子培养基中，在温度25～35℃，搅拌转速50～200转/分，通气量0.2～2：1体积/体积/每分钟（通气气体体积/发酵液体积/每分钟），培养18～72小时。

8.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的固体发酵培养中固体发酵培养基组成为：秸秆10千克，水20～60千克，葡萄糖0.5～3千克，黄豆饼粉0.5～2千克；硫酸铜5～15克，硫酸亚铁5～15克，硫酸锰5～20克，该培养基各成分可以按此比例放大。

9.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的发酵工艺为：按2～20%（种子液体积/发酵培养基重量），培养料厚度为0.1～0.4米，料宽0.5～2米，长度不限，通气量为0.3～1.5：1（气体体积/发酵培养基重量）/每分钟，培养时间为3天～23天，中途翻料1～2次。

10.根据权利要求1所述的一种米曲霉分泌木质素制备过氧化物酶的方法，其特征在于其中所述的生产木质素过氧化物酶粗品的工艺，将上述的固态发酵物粉碎，过20～100目筛，粉碎的发酵培养物与水按1：10～50比例混合，50～300转/分钟搅拌，5～10℃提取4～8小时，抽滤，滤渣用10～50倍的水混合，50～300转/分钟搅拌，5～10℃提取4～8小时，抽滤，两次滤液合并，通过分子量5000～10000的膜截留浓缩50～100倍，-20℃冷冻干燥，得到酶制剂粗品，由此工艺得到的酶制剂粗品，色质白色至褐色，木质素过氧化物酶活性可达到900～8000U/g干粗品。