[发明专利]一种海洋广盐性绿藻分离淡化培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及到微藻的技术领域，具体说是一种用于广盐性绿藻快速分离筛选及淡化的培养方法。

技术背景

微藻是一种分布广、生长快微型光合水生生物，其光能利用率比大田作物高几倍到几十倍，可以利用微藻开发各种食品、化学药品及人类健康的生物活性物质等各种产品，如胡萝卜素、虾青素、藻胆素、脂肪酸、多糖类、维生素、乙醇和生物柴油等产品。以上各种产品极具有经济价值。

鉴于以上藻类的优良特点及较高的商业价值，以此对藻类的应用和选择具有重要意义，优良藻种的选择显得更为重要。优良的藻种首先要具备生长快、适应性强、所需活性物质含量较高。盐度的广泛适应性是微藻适应性强和商业化的重要指标之一，现有几种商业化的藻类(如盐藻,雨生红球藻)皆满足生长速度快和所需活性物质含量较高，但对于盐度的适应性较差，在培养过程中极易因盐度的变化而导致培养失败；海洋中含有丰富的微藻种质资源，为从海洋中选择广盐性微藻提供了有利条件，现有技术首先将微藻分离后用海水培养，然后通过逐步加淡水的方式淡化，用时较长，效率较低且操作盲目性较大，不适合大量筛选广盐性藻类。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海洋广盐性绿藻快速分离筛选及淡化的培养方法，它可丰富现有广盐性藻的种类及淡化方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种海洋广盐性绿藻分离淡化培养方法，其特征在于：所述的海洋广盐性绿藻分离淡化方法包括如下步骤：a、采集的海水为海湾内或入海口处，将采集的海水用蒸馏水稀释10后后直接涂布于蒸馏水配制的琼脂培养基上，在20-28度，光照1000-4000Lux的条件下根据单藻落得生长速度培育7-20天，直到单藻落达到1mm左右的时候再进行转培养；b、将上述达到1mm左右的的单藻落用牙签或者接种环转移到新的蒸馏水配制的琼脂培养基上，通过划线方法进一步将藻类纯化，在20-28度光照1000-4000Lux的情况下培养7-20天；c、将上述琼脂培养基上生长良好的菌落再次接入蒸馏水配制的液体培养基培养，培养10天左右，生长出来的微藻就实现分离与淡化的效果。

我们用这种方法分离并淡化了大约30种海洋绿藻，30种海洋绿藻的成功分离及淡化培养的实验表明，此方法是一种有效的，效率高的方法，适合于海洋广盐性藻类分离、淡化、筛选，有较高的应用价值，为筛选广适应性的藻类提供了有效的方法。

附图说明

图1为海水稀释后直接涂板的藻类菌落生长效果图。

图2为转移划线培养后的藻类实体生长效果图。

图3为分离纯化后的微藻在淡水液体培养基内的生长效果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的描述。

本发明一种海洋广盐性绿藻快速分离筛选及淡化的培养方法，其特征在于：所述的一种海洋广盐性绿藻快速分离筛选及淡化的培养方法包括如下步骤：a、将从海洋中采集的水样用蒸馏水稀释直接涂布于蒸馏水配制的琼脂培养皿上，每个培养皿含有琼脂培养及15-40ml。其琼脂培养基组成如下：溶液20ml包含K₂HPO₄0.02g；MgSO₄.7H₂O 0.02g；KNO₃0.2g；土壤抽提液100ml，琼脂0.96-1.5g，其中土壤抽提液的制备方法：土壤取出一些杂物等在空气中风干用2-4mm的筛子过滤，加入两倍体积的蒸馏水高压灭菌15分钟用whatman No.1过滤后方可使用；所述土壤取自无污染、无施肥的、无喷洒化学药物的树林内土壤；b、将上述培养出的单菌落转移到新的琼脂培养基上通过划线方法进一步纯化；c、将上述划线纯化的单藻落接入液体培养基内培养，其液体培养基的组成如下：溶液20ml包含K₂HPO₄0.02g；MgSO₄.7H₂O 0.02g；KNO₃0.2g；土壤抽提液100ml，a步骤中将海水水样用10倍的蒸馏水稀释，取水样0.1-1ml直接涂与琼脂培养基上，放在温度20-28光照1000-4000Lux的环境下进行培养7-20天,a步骤和b步骤中琼脂培养是15-40ml,是液体培养加入0.8％-1.5％的琼脂后在121度灭菌20分钟后分装到各个培养皿内，用无菌封口膜密封备用，c、步骤中液体培养基是用蒸馏水配置好在121度高压灭菌20分钟后冷却备用，液体培养基体积为100ml。

实施例1一种海洋广盐性绿藻快速分离筛选及淡化的培养方法。