[发明专利]一种鉴别Q型烟粉虱单倍型的引物及鉴别方法无效
| 申请号： | 201210169228.4 | 申请日： | 2012-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN102676680A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 褚栋;国栋;陶云荔;杜兰英 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 王绪银 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 型烟粉虱单倍型 引物 鉴别方法 | ||
1.一种鉴别Q型烟粉虱单倍型的引物，所述引物为一对，分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
2.一种鉴别Q型烟粉虱单倍型的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）提取Q型烟粉虱基因组DNA，得基因组DNA溶液；
（2）以步骤（1）制得的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的一对引物对基因组DNA中的线粒体COI基因进行PCR扩增，制得PCR扩增产物；
（3）用限制性内切酶Hin1II酶切步骤（2）制得的PCR扩增产物，得酶切产物；
（4）对步骤（3）制得的酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，当PCR产物电泳图谱显示被测样品有小于100bp的一条条带时，则该被检测样品为Q型烟粉虱单倍型1；当PCR产物电泳图谱显示被测样品有大于100bp的一条条带时，则为Q型烟粉虱单倍型2。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中PCR扩增的扩增体系为：
基因组DNA溶液2.5μl，20μM引物0.5μl，5U/μl Taq酶0.25μl，10×Taq缓冲液2.5μl，10mM dNTP 0.5μl，ddH20补至25μl；
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中PCR扩增的扩增条件如下：
94℃预变性5分钟；94℃变性50秒，52℃退火40秒，72℃延伸50秒，进行35个循环；72℃延伸7分钟。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中限制内切酶Hin1II酶切反应条件如下：37℃酶切1-16小时。
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