[发明专利]同时测定丹参多酚酸中4种水溶性成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药领域的分析方法，特别涉及一种同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B含量的方法。

背景技术

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge）的干燥根及根茎，属于活血化瘀药中的活血调经药，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的传统功效。丹参化学成分主要包括水溶性成分和脂溶性成分，主要的水溶性成分是酚酸类成分，包括丹参素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸等。实验证明，丹参水溶性成分具有改善血液循环、减少脑梗死面积、抑制肾素血管紧张素系统、清除自由基、保护缺血脑组织神经元等多种药理作用。

注射用丹参多酚酸（冻干）就是以丹参中提取的水溶性有效部位丹参多酚酸为活性成分制成的冻干粉针剂，具有活血通络功能，用于治疗轻中度脑梗死引起的半身不遂，口舌歪斜，舌强言謇，偏身麻木等症状。

为检测丹参多酚酸中水溶性有效成分，本发明经过反复研究，最终得出一种采用高效液相色谱方法，可以对丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B中的1~4种同时进行含量测定，该方法对丹参多酚酸的质量控制具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于建立一种能够同时检测丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B含量的方法。

具体来说，本发明为采用HPLC法，采用C18色谱柱，二元梯度洗脱，同时测定任意1~4种上述化合物，即丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量。

其中所述二元梯度洗脱为磷酸水-磷酸乙腈水体系。

为了保证丹参多酚酸中酚酸类物质的酚羟基和羧基的电离被有效抑制，而不会受到流动相梯度变化的影响，所以在两个流动相中均加入相同比例的磷酸，均为0.02%。

具体来说，所述的流动相梯度洗脱条件为：

本发明所述的测定方法，其中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的混合对照品在200-400nm范围内扫描，四种物质在280nm处均有较强吸收，灵敏度高，重复性好，因此选择280nm作为检测波长，柱温30℃，流动相流速为1mL·min^-1。

本发明所述的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品混合溶液的制备；

步骤2：丹参多酚酸或其相关产品供试品溶液的制备；

步骤3：将对照品混合溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；

步骤4：根据色谱图计算供试品溶液中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量。

其中所述：

步骤1：对照品溶液的制备，是制备一种混合溶液，该混合溶液中含有一定浓度的丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B四种对照品，所述对照品是纯度极高的用于做对比实验用的产品，这些产品均属于现有技术，可以从市场上购买得到，本发明对照品溶液的制备方法可以采用以下方法：

分别称取丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品，混合后加醇溶解得到混合对照品溶液。如采用以下方法：称取丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品，混合后加入甲醇溶解，得丹酚酸D质量浓度为21.10ug·mL^-1、迷迭香酸质量浓度为39.4ug·mL^-1、紫草酸质量浓度为41.4ug·mL^-1、丹酚酸B质量浓度为539.00ug·mL^-1。

步骤2：供试品溶液的制备，是制备丹参多酚酸或其相关产品的溶液，所述丹参多酚酸或其相关产品是指以丹参多酚酸作为活性成分的产品，如含有丹参多酚酸的药品、保健品等，具体如注射用丹参多酚酸制剂。

本发明所述丹参多酚酸或其相关产品的供试品溶液制备方法为：称取丹参多酚酸或其相关产品，用醇溶解得到溶液，如果有不溶解的物质，过滤除去。

所述溶液优选甲醇溶液，如称取丹参多酚酸或其相关产品加入甲醇使溶解，得到丹参多酚酸或其相关产品的甲醇溶液，溶液浓度可以是10-20mg丹参多酚酸用甲醇溶解并定容到20-30ml，优选25ml中含有丹参多酚酸15mg。如果是含有丹参多酚酸的相关产品，其称量时可以按照丹参多酚酸的含量来确定称量量，使溶液中含有丹参多酚酸的量为10-20mg。

步骤4：根据色谱图计算供试品溶液中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量。

所述计算是采用色谱图中的峰面积作为含量指标，通过标准曲线法计算待测样品中各成分的含量，该计算方法属于现有技术。