[发明专利]一种从青花菜茎叶废弃物中提取硫代葡萄糖苷的方法

权利要求书

1.利用青花菜等含有硫代葡萄糖苷的植物中的茎叶废弃物获得硫代葡萄糖苷的提取物的方法，包括如下步骤：

1)制备硫代葡萄糖苷的提取液。

取青花菜茎叶，冻干，粉碎过筛，精确称取200mg冻干样品至离心管中，于75℃水浴中保温1分钟，加入2mL70％甲醇后于75℃水浴中提取10min，然后加入200μL 0.6mol·L^-1醋酸钡，在8000r·min^-1、4℃下离心10min。转移上清液于刻度试管中并进行冰浴。沉淀再加入2mL 70％甲醇提取并离心，共重复提取三次。混合上清液并用70％甲醇定容至5mL。

2)制备阴离子交换柱。

称取一定量的DEAE-Sephadex A-25浸泡于2mol·L^-1的醋酸溶液中，不时搅拌使其充分膨胀活化，除去溶液上层漂浮的细小颗粒，同时用减压法除去交联葡聚糖中存留的气泡。依次用超纯水、2mol·L^-1醋酸溶液充分洗涤层析柱，倒入2mol·L^-1醋酸溶液至1/2柱高，除去层析柱内死区以及下端塑料管内的气泡。将已充分溶胀的交联葡聚糖沿管壁倒入柱中，使其自由沉降至柱底，同时不断轻敲管壁，使沉降均匀紧密。最终交联葡聚糖形成的柱床体积为0.5mL。待柱床体积稳定后，加入2mL6mol·L^-1咪唑甲酸将层析柱清洗一遍，再用2mL超纯水清洗两遍。

3)纯化

取2mL提取液流经醋酸型DEAE-Sephadex A-25阴离子交换柱，用1mL超纯水洗脱两次。混合洗脱液，用0.45μm的微孔滤膜过滤、封口，置于-20℃下保存直至HPLC分析。

4)固化

最终的洗脱液可以使用常规方法或其它方法进行处理，获得最终的固体提取物。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤1)中所述甲醇为色谱纯。

3.根据权利要求1的方法，其中步骤1)中所用离心机为冷冻离心机。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤2)中制备的阴离子交换柱为醋酸型DEAE-SephadexA-25阴离子交换柱。

5.根据权利要求1的方法，其中步骤2)中所用的层析柱规格为内径5mm，长度15cm。

6.根据权利要求1的方法，其中步骤3)中所用微孔滤膜孔径为0.45μm。

7.根据权利要求1的方法，其中步骤3)中所述用1mL超纯水洗脱的过程不能过快，是一个极缓慢的过程。

8.根据权利要求1的方法，其中步骤3)中的最终洗脱液较之前的原始材料含有更纯形式的硫代葡萄糖苷。硫代葡萄糖苷的含量主要取决于青花菜、花椰菜的品种，不同品种间的硫代葡萄糖苷的含量差异显著。

9.根据权利要求1的方法，其中步骤4)中所涉方法为常规蒸发、冷冻干燥等。

10.根据权利要求1-7中的任一方法，其中所述材料为含有硫代葡萄糖苷的植物收获产品器官后的茎叶废弃物。