[发明专利]一种用海藻酸钠-壳聚糖固定磷脂酶A2的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种固定磷脂酶A₂的方法。

背景技术：

磷脂酶A₂(PLA₂)是一类能够在磷脂甘油部分的Sn-2位点选择性断裂酯键的酶，其可将磷脂水解成一系列生物活性介质；由于PLA₂酶源来自猪胰腺，相对短缺，未推广开。最早将酶法脱胶用于工业生产的是德国Lurgi公司，国内也有不少相关报道，现今用于脱胶的酶主要是Novo公司推出的Lecitase 10L(PLA₂)，Lecitase Novo(PLA₁)和Lecitase Ultra(PLA₁)。其中，猪胰脏来源的磷脂酶Lecitase10L已不用于油脂脱胶，而被更具优势的微生物Rohalase MPL(PLA₂)所代替。

但是，游离的Rohalase MPL(PLA₂)价格昂贵，不易回收，而且对条件要求较高，不能够适应苛刻的水解条件。而对于固定化磷脂酶A₂来讲，其有以下优势：(a)易于将固定化酶与底物、产物分开，方便后续的分离和纯化；(b)酶的稳定性和最适温度提高，最适pH值改变，对温度和pH值适应范围增大，对抑制剂和蛋白酶敏感性降低；(c)可以增加产物的收率，提高产物质量；(d)可以在较长时间内连续生产；(e)酶反应条件容易控制；(f)较水溶性酶更适合于多酶反应；(g)酶的使用效率高，使用成本低；(h)适于产业化、连续化、自动化生产等。

制备固定化酶的方法主要有吸附、包埋、共价键结合和交联法等，其中包埋法不需要化学修饰酶蛋白的氨基酸残基，具有反应条件温和、很少改变酶分子结构、酶活力损失小等优点。海藻酸钠、壳聚糖是最为常见的包埋材料，因此可用其来作为固定化酶的载体。二价金属离子如Ca²⁺与可溶性海藻酸钠反应生成海藻酸钙微凝胶，而海藻酸钠、壳聚糖可与戊二醛基形成Schiff氏碱，在胶囊表面形成一层致密的保护膜，可增加微胶囊球的强度。以海藻酸钠-壳聚糖为包埋材料，戊二醛为交联剂，固定化PLA₂，最终选择出最优的固定化条件。

发明内容

本发明是为了解决酶法脱胶过程中，游离磷脂酶A₂易失活变性且不易回收、但是现今磷脂酶A₂的固定化未见报道的问题，而提出的用海藻酸钠-壳聚糖固定化磷脂酶A₂的方法。用海藻酸钠-壳聚糖复合载体固定化磷脂酶A₂的方法通过以下步骤实现：一、磷脂酶A₂的固定化。二、固定化酶酶活力的测定。三、海藻酸钠-壳聚糖固定化条件的优化。四、通过固定化酶微球的SEM图像进一步解释利用海藻酸钠-壳聚糖复合载体固定化磷脂酶的优势。

采用海藻酸钠-壳聚糖作为载体固定化磷脂酶A₂，海藻酸钠-壳聚糖作为载体，不需要化学修饰酶蛋白的氨基酸残基，具有反应条件温和、很少改变酶分子结构、酶活力损失小等优点；此外，海藻酸钠-壳聚糖固定化磷脂酶A₂最终得到的固定化酶微球机械强度好，酶活回收率可以达到74.8％，对于油脂精炼中的酶法脱胶工艺具有重要指导意义。

具体实施方式