[发明专利]利用固定化酶从花生饼粕中生产活性肽的方法

说明书

技术领域

本发明方法涉及花生副产物的深加工技术领域，具体涉及一种花生活性肽的酶法制备工艺，是以花生饼粕为原料，利用化学改性的磁性壳聚糖微粒固定复合蛋白酶水解，从而获得花生活性肽的方法。

背景技术

花生是世界上种植的主要农作物之一。我国是花生的生产大国，花生产量常年稳居世界首位，花生年产量在1400万吨左右。花生营养丰富，富含优质蛋白和油脂，脂肪含量在44－50%，蛋白质含量在24－34%，且含有多种维生素和矿物质。花生蛋白含有人体所必需的8种氨基酸，消化性可达99%，是营养价值高且资源丰富的植物蛋白资源。由于花生营养丰富且风味独特，所以深受我国人民的喜爱。目前，花生除一部分用于食品加工以外，50%以上的花生用于榨油。由此，我国每年产生数百万吨的蛋白含量大于50%的花生饼粕。由于我国花生深加工技术和产业化水平低，花生饼粕中蛋白的利用有限，大量的花生饼粕用作动物饲料或肥料，产品附加值低，资源浪费严重。因此，有必要开展花生饼粕中蛋白深加工方面的研究。

生物活性肽是通过酶法水解、化学改性或物理作用得到的具有特殊生理功能的肽类。生物活性肽具有的生理功能有抗氧化、调节血压、促进微量元素吸收、调节免疫、调节睡眠等功效。与化学药物相比，生物活性肽具有毒副作用小、功效平缓、成本低等优势，因此国内外已经有活性肽药品、保健品上市，并得到了消费者的认可。研究表明，花生蛋白采用酶法水解具有显著的抗氧化、降低血压功能，研究花生饼粕制备花生活性肽有利于开发花生饼粕这一潜在的蛋白资源，生产高附加值的蛋白产品。

目前，花生蛋白生产活性肽的工艺主要有化学处理和酶法水解两大类。化学处理会降低花生肽的品质，且生产过程中产生的酸碱废液污染环境，这限制了化学处理的发展。采用酶法水解花生蛋白时，蛋白酶成本较高，单一酶水解蛋白有限，且酶在热、酸碱及有机溶剂中不稳定，这也限制酶法制备花生活性肽的工业化转化。固定化酶技术虽然一定程度上提高酶的利用率，但是酶解效果不佳。主要是酶与载体结合后，形成空间位阻阻碍酶与底物的结合，同时，加入的化学交联剂也会影响酶活。因此，提高酶稳定性、回收率和酶解效率是酶法生产活性肽工艺中需要解决的难题。

发明内容

本发明目的在于提供一种利用固定化酶从花生饼粕中生产活性肽的方法，采用该方法所得花生活性肽纯度高且活性好。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种利用固定化酶从花生饼粕中生产活性肽的方法，其包括如下步骤：

1）制备化学改性的磁性壳聚糖微粒：

在碱性条件下，将壳聚糖粉末与环氧氯丙烷混合后于50-70℃搅拌反应1-2 h，然后加入二胺化合物继续反应1.5-2.5 h，反应结束后固液分离，取固体备用，投料比按照每1g壳聚糖粉末添加3-5ml环氧氯丙烷和1-5ml二胺化合物计；将固体用稀酸（所用稀酸可以是乙酸、盐酸、硫酸等）溶解后，加入三聚磷酸钠和粒径≤100nm、纯度不小于95%的四氧化三铁超声波搅拌处理，三聚磷酸钠的加入量为固体重量的0.05-0.1倍，四氧化三铁的加入量为固体重量的0.25-0.75倍，反应完毕后用磁铁吸附体系中的固体颗粒，即为改性后的磁性壳聚糖微粒，记为固体颗粒a；

2）磁性壳聚糖固定复合蛋白酶：将上述改性后的磁性壳聚糖微粒（即固体颗粒a）加入到含2-5V%戊二醛的磷酸缓冲液中室温下搅拌1-3 h，然后加入含复合蛋白酶的磷酸缓冲液继续搅拌3-6 h，结束后用磁铁将体系中的固体颗粒吸附出，记为固体颗粒b，备用（固体颗粒b可4℃储存于磷酸缓冲液中，长期储存时，应冷冻干燥保存）；其中，所述磷酸缓冲液浓度为0.05－0.2 mol/L，pH 6.8-8.0；投料比按照每1g改性后的磁性壳聚糖微粒添加10-30mL含戊二醛的磷酸缓冲液和2-6 mL含复合蛋白酶的磷酸缓冲液计，复合蛋白酶在体系中的质量终浓度为0.1-2.5%；

3）制备花生蛋白：将花生饼粕粉碎、脱油后，采用碱提酸沉提取花生蛋白；

4）制备花生活性肽：将花生蛋白用蒸馏水溶解（以每1g花生蛋白用8－12ml蒸馏水溶解为宜）并调至pH为 8.0－10.5，然后加入固体颗粒b于35－50 ℃酶解2－4h，酶用量为3000－4000 u/g蛋白，反应结束后调至酶解反应体系pH为7.0；酶解过程搅拌转速以80－120 rpm为宜。