[发明专利]一种定量PCR法检测CHO细胞DNA残留量的方法及其标准品的建立在审
| 申请号： | 201210161343.7 | 申请日： | 2012-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN103421885A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 王军志;饶春明;王兰;高凯;李永红 | 申请（专利权）人： | 中国食品药品检定研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/12 |
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| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定量 pcr 检测 cho 细胞 dna 残留 方法 及其 标准 建立 | ||
1.定量检测CHO细胞DNA含量的标准品，是作为“代表国标”的阳性对照使用的CHO细胞全长基因组。
2.根据权利要求1所述的标准品，其特征在于：定量检测为定量PCR检测。
3.权力要求1和2所述的标准品在实时定量PCR法检测CHO细胞宿主DNA残留量中应用。
4.一种实时定量PCR检测CHO细胞宿主DNA残留量的方法，是以待检测样品和权力要求1中所述的标准品为模板，利用根据CHO细胞特异性的保守序列-Alu序列设计的引物和Taqman探针进行定量PCR，对待测样品CHO细胞宿主DNA残留量进行定量。
5.根据权力要求4所述的Taqman探针PCR方法，其特征在与针对Alu序列的引物和探针为：
CHO Alu Forward Primer：5’-CAA TTC CCA GCA ACC ACA TG-3’
CHO Alu Reverse Primer：5’-GAA GAG GGC ACC AGA TCT CAT T-3’
CHO-Alu Probe：5’荧光基团-TGG CTC ACA ACA ATC-荧光淬灭基团3’。
6.根据权力要求4和5所述的定量PCR检测体系的设计方法，其特征在于：
(1)检测体系退火温度的确定；
(2)检测体系探针浓度和引物浓度的确定；
(3)将国家标准品稀释到每μL含1000pg、100pg、10pg、1pg、0.1pg、0.01pg、0.001pg，得到标准曲线，检测该检测体系的灵敏性、定量限、线性范围。
7.一种定量PCR法测定CHO细胞DNA残留量，其特征在于：通过PrepSEQ Residual DNA Sample Preparation Kit建立了待测样品前处理方法，从而避免基质效应对于定量PCR测定的影响。
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