[发明专利]一种抑制鸡肌肉生成抑制素基因表达的siRNA及其应用

说明书

本申请是申请号为200910235403.3、申请日为2009年10月13日、发明名称为“抑制鸡肌肉生成抑制素基因表达的siRNA及其应用”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种抑制鸡肌肉生成抑制素基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

2006年我国禽肉产量1506.6万吨，仅次于美国，位居世界第二，比1985年增长了6.5倍，而同期世界禽肉产量只增长了1.4倍。据FAO统计，我国肉鸡屠宰量从1990年的21.29亿只增加到2006年的76.95亿只，净增加55.66亿只。鸡肉产量从1990年的266.32万吨增加到2006年的1070.1万吨，净增加803.78万吨。目前我国禽肉产量占肉类总量的18.7%，人均占有量1.5千克，同比世界禽肉产量比例30.3%还有很大的上升空间。

白羽肉鸡是快大型商品化选育的鸡种，具有生长快，产肉多的特点，但肉质较差。地方优质鸡品种肉质鲜嫩，风味佳，但是生长缓慢，产肉较少。二战以后，快大型白羽肉鸡的育种进展很快，与1957年相比，快大肉鸡达到上市体重的时间缩短了69天，目前只需32天即可上市。优质鸡在我国有丰富的种质资源，粗略统计约有100多个地方鸡种，如三黄鸡，麻鸡，狼山鸡，油鸡等。这些鸡肉质鲜嫩，色香味美，其中乌鸡还具有很高的药用价值。优质鸡种长期作为我国肉鸡生产的特色产业，具有广阔的市场空间，深受消费者欢迎。虽然价格相较于快大型白羽肉鸡要贵一倍甚至更多，但是其需求量仍在不断增长。国外知名的肉鸡育种公司也一直在觊觎这个庞大市场。但是优质鸡的育种进展缓慢，达到1.5Kg时日龄不少于50天。目前优质鸡育种工作遵循世代传递清晰的传统育种方法，父系、母系均采用一年一个世代的育种方案，凭经验选取质量性状，建立育种群进行世代杂交来选育。这样不仅世代间隔长，选择强度低，并且产肉量和肉质性状与其它质量性状杂交乱配，导致育种效率低下，遗传进展缓慢。因此目前亟需加快我国优质鸡育种技术体系创新。国家对此也相当重视，自从1980年国家科委设立优质黄羽肉鸡选育计划以来，其后每个五年计划都有涉及优质鸡育种攻关计划，以期提高优质肉鸡的产肉量和肉品质。

1998年Fire等将双链RNA（dsRNA）注入线虫体内，相关基因的表达被特异性的抑制，产生了与基因敲除一样的缺陷型。他们把这种基因转录后却被抑制表达的现象叫做RNAi（RNA interference）。其机制是生物细胞内的长双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）被Dicer酶结合并切成长度为21-23bp的小干扰RNA分子（small interfering RNA，siRNA）。siRNA识别并结合靶基因转录后的mRNA上的同源序列，引导RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC）将mRNA降解，导致转录后的基因沉默(posttranscriptional gene silencing，PTGS)。近年来的研究发现，RNAi现象广泛存在于动植物体内。除了siRNA以外，具有茎环结构的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在细胞内经过加工后也可以变成siRNA，并诱导RNA干扰，而且作用时间更为持久。这样使得针对一些具有潜在利用价值的基因构建shRNA表达载体，并导入生物体内，特异性的对靶基因表达进行干扰，从而使动植物相关基因的表达被长期沉默成为可能。也预示着动植物在医学医药，生物科技和畜牧业生产中潜在的巨大实用价值。

肌肉生成抑制素基因（Myostatin，MSTN)是1997年McPherron等从小鼠骨骼肌cDNA文库中筛选出的一种负性调控骨骼肌生长的基因。

发明内容

本发明的目的是提供一种抑制鸡肌肉生成抑制素基因表达的siRNA及其应用。

本发明提供的作用于肌肉生成抑制素基因的小干扰RNA，为如下a)或b)或c)：

a)由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸序列组成的双链RNA；

b)由序列表的序列3和序列表的序列4所示核苷酸序列组成的双链RNA；

c)由序列表的序列5和序列表的序列6所示核苷酸序列组成的双链RNA。

本发明还保护以上任一所述小干扰RNA在抑制细胞的肌肉生成抑制素基因表达中的应用。

所述肌肉生成抑制素基因可为GenBank Accession Number:NM_001001461自5’末端第1至1128位核苷酸。

所述细胞具体可为鸡胚成肌细胞。