[发明专利]一种利用山药带腋芽茎段组织培养方法

说明书

技术领域

本发明“一种利用山药带腋芽茎段组织培养的方法”，是由山药带腋芽茎段外植体经组织培养获得试管苗，属于生物技术领域。

背景技术

山药（Dioscorea Opposita Thunb.），为薯蓣科薯蓣属多年生草质缠绕性藤本植物，我国南北各地均有种植。因其具有较高的营养价值和药用价值，是我国地道的药材和传统出口商品，其产品畅销东南亚和日本等国。由于长期进行营养繁殖, 不仅用种量大、扩繁速度慢, 还因连续种植使病毒不断积累导致种性退化，使其种植面积逐年下降，严重影响了质量和产量的提高。利用植物组织培养技术建立山药离体再生体系, 不仅可以加快山药种苗繁殖速度，提高其繁殖效率，而且可显著改善其品质，提高其产量。山药组织培养的研究国内外均有报道，但多以茎段、零余子等诱导愈伤组织为研究内容，不利于保持品种的稳定性。离体条件下利用山药带腋芽茎段诱导获得试管苗，可明显提高繁殖系数和繁殖速度。它不仅具有繁殖率高和利于诱导形成零余子（另申请专利）的特点，而且利于保持本品种的优良特性。

发明内容

技术问题  

本发明的目的是找到既能提高山药种薯繁殖系数和繁殖速度，又能保持品种稳定性的方法，此方法具有繁殖系数高、繁殖速度快、繁殖效率高，种苗病毒少、遗传稳定性好且不受环境条件的影响等优点，可以弥补现有山药薯块繁殖系数低、愈伤组织诱导组培苗繁琐、时间长、效率低的不足，从而为山药种薯扩繁提供一种新的方法。

技术方案

一种利用山药带腋芽茎段组织培养的方法，包括以下步骤：

（1）材料处理：将山药的块茎浅埋在细沙中，栽培在恒温（25℃）培养室中，长出幼苗时待用。

（2）外植体的灭菌：取铁棍山药的嫩茎，去掉叶片，用剪刀截成2-3cm带腋芽的茎段，流动水冲洗10min左右。在超净台上用75%酒精浸泡30s，用NaClO灭菌20min，无菌水漂洗5-7次，用解剖刀切去末端留下约1.5-2cm左右的茎段接种在MS培养基中。

（3）芽的诱导分化：外植体经灭菌后接种6-BA0.5-1mg·l^-1，NAA0-0.1mg浓度的MS培养基中。

（4）继代增殖：诱导培养基上萌发出的不定芽长到带两片和两片以上叶片的时候，切取单芽接种在6-BA 1.5mg·l^-1，NAA 0mg·l^-1浓度的MS培养基中。

（5）生根培养：将高2.0 cm以上、带有2片或两片以上叶的健壮小苗切下, 转入生根培养基上进行培养。生根培养基成分为6-BA1.0mg·l^-1，NAA0.2mg·l^-1，活性炭0.02%浓度的MS培养基中。

（6）培养条件：培养室温度为25±2℃，光照强度1200-1500lx，每天光照12h/d。培养基中琼脂的质量分数为7g/L，蔗糖的质量分数为30g/L。

 

有益效果  

本发明能够由带腋芽茎段外植体诱导获得山药组培苗，从而可以室内大量繁殖试管苗，实现山药种薯繁殖工厂化生产。此方法包括几个阶段培养基成分以及处理方法，仅20天左右就可以获得完整组培苗。

本发明具有繁殖系数高、繁殖速度快、繁殖效率高，种苗病毒少、遗传稳定性好且不受环境条件的影响的特点。

日本白、无架山药等品种，利用带腋芽茎段按本发明进行组织培养，均可得到完整组培苗。其中日本白的增殖倍数为2.5，无架山药为1.5。

 

附图说明

图1带腋芽茎段。

图2丛生芽。

图3 继代培养

图4 生根培养。

图5 组培苗。

 

具体实施方式

下面通过基于带腋芽茎段外植体诱导获得山药组培苗实施例进一步说明本发明。

1 材料处理

将来源于河南温县的铁棍山药的块茎浅埋在细沙中，栽培在恒温（25℃）培养室中，长出幼苗时待用。

2 培养基灭菌及培养条件

高压灭菌前调整培养基pH值为5.8，保持121℃灭菌20min。培养室温度为25±2℃，光照强度1200-1500lx，每天光照12h。培养基中琼脂的质量分数为7g/L，蔗糖的质量分数为30g/L。

3 外植体的灭菌试验

3.1 试验设计