[发明专利]一种酶法制备东北核桃楸种仁蛋白降血压肽的工艺条件

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶法制备东北核桃楸种仁蛋白降血压肽的工艺条件。 

背景技术

核桃楸(Juglans Mandshurica Maxim)产自黑龙江小兴安岭海拔500-800m以下，及东部山区、吉林、辽宁、内蒙古东部、河北、山西等地。核桃楸种仁中含有丰富的蛋白质、多种人体必需脂肪酸及对人体有必要作用的钙、镁、磷、锌、铁等22种矿物元素。其蛋白质消化率达87.2%，18种氨基酸齐全，且人体所需的8种必需氨基酸含量比例适合，对人体生理有重要功能的谷氨酸、天门冬氨酸、精氨酸的含量均较高，故核桃蛋白是一种良好的蛋白源。 

以核桃楸种仁为原料，制备蛋白多肽的研究已有报道，胡新颖利用木瓜蛋白酶水解核桃楸蛋白，确定了酶解的最佳工艺条件，并采用了凝胶色谱分离法对核桃多肽进行了分离纯化，经分离后得到中间部分为分子量5000左右的多肽混合物。李勇利用Alcalase蛋白酶对核桃楸蛋白水解制备核桃楸活性肽，得到最佳水解条件为温度55℃，pH9.0，底物浓度8%，酶质量分数6%，水解时间2.0h，此时核桃楸蛋白得到很大程度的水解，水解度为76.16%。包怡红，盛和静等研究了核桃楸蛋白多肽的制备及对羟自由基的清除作用，结果表明风味蛋白酶为水解核桃楸蛋白的最佳酶制剂，并对不同水解度的核桃楸蛋白肽的清除羟基自由基能力做了比较，当水解度为5%时，自由基清除率最高可达50.90%。 

降血压肽亦称血管紧张素转换酶（Angiotension converting enzyme，简称ACE）抑制肽，通过抑制ACE的活性而达到降血压的作用。源于食品蛋白质（乳蛋白、动物蛋白、植物蛋白）的ACE抑制肽因其对人体安全无副作用，越来越受到人们的关注。植物蛋白是制备降血压肽的主要来源，国内外已有许多研究人员对植物源降血压肽的制备、纯化已经进行了较为深入的研究。如利用大豆蛋白、花生蛋白、杏仁蛋白等制备降血压肽。 

目前对于东北核桃楸种仁蛋白制备降血压肽的研究还未见报道。本发明利用脱脂后的东北核桃楸种仁提取蛋白质，进而开发研究制备降血压肽，能有效利用东北核桃楸种 仁的应用价值。 

发明内容

技术问题 

本发明的目的在于提供一种酶法制备东北核桃楸种仁蛋白降血压肽的方法。该方法是一种较为较为安全，且方便可行的方法。

技术方案 

1.本发明是一种酶法制备东北核桃楸种仁蛋白降血压肽的工艺条件，是以东北核桃楸种仁为原料，经过去除种衣、粉碎、超临界CO₂脱脂后，提取种仁蛋白；将东北核桃楸种仁蛋白配制浓度为2%的溶液，以碱性蛋白酶酶解蛋白溶液，控制相应的酶解条件，酶解过程注意控制相应pH，酶解后沸水浴灭酶。将酶解物离心，上清液经过超滤处理（截留分子量为5000Da），将透过液浓缩后真空冻干，得到东北核桃楸种仁蛋白降血压肽的工艺。包括如下步骤： 

（1）东北核桃楸种仁脱皮、吹干、粉碎过20-40目筛后，备用； 

（2）将粉碎后的东北核桃楸种仁进行超临界CO₂脱脂，重复2次，充分除油后，备用； 

（3）以脱脂东北核桃楸种仁为原料，提取种仁蛋白；蛋白液经酸沉、透析、真空冻干后备用； 

（4）将东北核桃楸种仁蛋白配制成2%的蛋白溶液，加入碱性蛋白酶进行酶解，过程中注意控制相应pH条件； 

（5）酶解后灭酶，将酶解物离心后，取上清液进行超滤处理； 

（6）超滤透过液经浓缩后，真空冻干得到东北核桃楸种仁蛋白降血压肽。 

2.本发明步骤（1）所述的脱皮处理采用碱液浓度为1%的NaOH浸泡，温度65℃，时间为5-10分钟，然后以自来水冲洗至种仁恢复本色，且无滑腻感；25℃鼓风吹干。 

3.本发明步骤（2）所述的超临界CO₂脱脂条件为压力35MPa，温度40℃，时间2.5小时。 

4.本发明步骤（3）所述的蛋白制备所用的提取液为0.02mol/LNaOH溶液，用量为3升/100克脱脂种仁，提取温度40℃，提取时间2小时；以0.1mol/L的HCl和NaOH调节蛋白溶液pH4.5使之沉淀；再调节蛋白沉淀pH至7后透析，所采用的透析袋其截留分子量大于500。 

5.本发明步骤（4）所述的酶解时，酶解pH7-12，酶解温度30-70℃，酶解时间1-6h，加酶量为3000-7000U/g底物。酶解过程以0.1mol/LNaOH控制相应pH条件。